Mechanische Dissoziation: Eine Methode, um lebensfähige Zellen aus einem Gewebe zu gewinnen

Zusammenfassung

Quelle: Garaud et. al., Ein einfaches und schnelles Protokoll zur nicht-enzymatischen Dissoziation frischer menschlicher Gewebe für die Analyse infiltrierender Lymphozyten. J. Vis. Exp. (2014).

Dieses Video beschreibt die nicht-enzymatische Dissoziation von frischem menschlichem Gewebe, um lebensfähige Zellen zu erhalten. Die Technik wird für die qualitative und quantitative Analyse von CD45-positiven Zellen (Lymphozyten/Leukozyten) verwendet, die in verschiedenen normalen und bösartigen menschlichen Geweben vorhanden sind.

Protokoll

1. Vorbereitung des Gewebehomogenats

Das
1. präparierte resezierte Gewebe (bösartiges und normales Gewebe, das aus dem Operationssaal reseziert wurde) wird im Pathologielabor von geschultem Personal zur sofortigen Entnahme durchgeführt. Tumor-, NANT- (so weit wie möglich vom Tumor entfernt) und normale Gewebefragmente werden routinemäßig innerhalb von 1 - 3 Stunden nach der chirurgischen Exzision in einem BSL2-Labor unter Verwendung der für menschliches Gewebe üblichen Biosicherheitsverfahren verarbeitet. Ein Flussdiagramm des Protokolls ist in Abbildung 1 dargestellt.
2. Wiegen Sie alle Gewebefragmente (normal, NANT und Tumor) und mes....

Ergebnisse

Abbildung 1: Ablaufdiagramm des Protokolls.Unser Verfahren zur Aufbereitung von frischem menschlichem Gewebe und einige analytische Ansätze, die anschließend zur Beurteilung von Lymphozyten verwendet werden können, die in menschliches Gewebe eindringen, werden gezeigt.

Abbildung 2: H&E-gefärb.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
GentleMacs Dissoziator	Miltenyi Biotec	Tel.: 130-093-235	BD Medimachine ist in etwa gleichwertig
Zentrifuge 5810 R	Eppendorf		oder eine andere Standard-Tischzentrifuge
Zentrifuge 5417 R	Eppendorf		oder eine andere Standard-Mikrozentrifuge
Esco Klasse II A2 Biosicherheitswerkbank	ESCO weltweit		oder eine andere Standard-BSL2-Haube
Inverses Mikroskop	Nikon eclipse TS100		oder ein anderes Mikroskop, das für ein Hämazytometer kompatibel ist
Bürker Kammer Marienfield		Artikel-Nr.: 640210	oder ein anderes Standard-Hämazytometer
Navios Durchflusszytometer	Beckman Coulter		oder ein anderes Durchflusszytometer (8-10 Farben empfohlen)
GentleMacs C-Röhre	Miltenyi Biotec	Tel.: 130-096-344	BD Medimachine verwendet Filcon
Zellkulturschale	Sarstedt	72.710	oder andere nichtpyrogene Kunststoffwaren
Einweg-Skalpell	Swann-Morton	510	oder steriles Standard-Skalpell zum Einmalgebrauch
BD Zellsieb 40 μm	Becton Dickinson	Tel.: 734-0002	oder andere nichtpyrogene Kunststoffwaren
BD Falcon Tube 50 ml	Becton Dickinson	Artikel-Nr.: 352070	oder andere nichtpyrogene Kunststoffwaren
BD Falcon Tube 15 ml	Becton Dickinson	352097	oder andere nichtpyrogene Kunststoffwaren
BD FACS Röhrchen 5 ml	Becton Dickinson	352008	oder andere nichtpyrogene Kunststoffwaren
Sterile Pasteurpipette 5 ml	VWR	Nr. 612-1685	oder andere nichtpyrogene Kunststoffwaren
Mikrofuge Röhrchen 1,5 ml	Eppendorf	Tel.: 7805-00	oder andere nichtpyrogene Kunststoffwaren
X-Vivo 20	Lonza	BE04-448Q	serumfreies Medium empfohlen
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung	Lonza	BE17-516F	Standard physiologisches PBS
Trypan-Blau	VWR	17942E	oder ein anderer lebenswichtiger Fleck