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Methodenartikel
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30. April 2023
Quelle: Van den Bijgaart R.J.E. et al., Ex vivo Live-Bildgebung von Lungenmetastasen und ihrer Mikroumgebung, J. Vis. Exp. (2016)
Dieses Video beschreibt eine Methode zur Vorbereitung von Lungen für die ex vivo Live-Bildgebung, um Wechselwirkungen zwischen Krebszellen und Stromazellen zu untersuchen, wobei Agarose zum Aufblasen verwendet wird. Im Probenprotokoll wird das Agarose-Aufblasverfahren beschrieben, bevor lebende zelluläre Wechselwirkungen beobachtet werden.
Alle Verfahren, die Tiere betreffen, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Vorbereitung der Lunge für die ex vivo Live-Bildgebung
HINWEIS: Versuchen Sie, so steril und vorsichtig wie möglich zu arbeiten, um unnötige Herausforderungen für die Immunzellen in der Lunge zu vermeiden.
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Abbildung 1. Protokoll zur Vorbereitung der Lunge für die Live-Bildgebung.(A) Freilegung der Luftröhre nach Präparation der Maus. (B) Kleiner Schnitt in der freiliegenden Luftröhre parallel zu den Knorpelringen. (C) 20 G Nadel 4-5 mm in die Luftröhre einführen. (D) Instillieren von 400 μl 2 % Agarose bei ni.......
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| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Anästhetikum | Na | Na | Von der IACUC zugelassene Anästhesie, die für die Anästhesie und/oder Sterbehilfe verwendet wird |
| PBS, USP steril | Amresco INC | K813-500ML | Ultrareine Sorte für die intravenöse Injektion |
| 1X PBS | UCSF-Zellkulturanlage | Na | |
| Plattform aus Styropor | Na | Na | Wird als Sezierbrett verwendet |
| Feine Schere scharf | Werkzeuge für die Feinwissenschaft | Nr. 14060-11 | |
| 20 G x 1 Nadel, kurze Fase | Bd | 305178 | |
| Zange | Roboz Chirurgischer Laden | RS-5135 | |
| 1 mL Spritze ohne Nadel | Bd | 309659 | |
| Agarose bei niedriger Schmelztemperatur | Lonza | 50111 | Um 10 ml Lösung herzustellen, wiegen Sie 0,2 g Agarose, fügen Sie 1 x PBS zu 10 ml hinzu und erhitzen Sie sie, um sich aufzulösen. Agarose erstarrt bei Raumtemperatur, also in einem 37 °C warmen Wasserbad aufbewahren, bis sie zum Aufblasen verwendet wird. |
| RPMI-1640 Medium ohne Phenolrot | Lebenstechnologien | Tel.: 11835-030 | |
| 24-Well-Speicherfolie | E&K wissenschaftlich | EK-42892 | |
| Glasabdeckfolien, 15 mm | Fisher Scientific | Tel.: 22-031-144 | |
| Digitaler CO2- und Temperaturregler | Okolab | DGTCO2BX | http://www.oko-lab.com |
| Klimakammer | Okolab | Na | http://www.oko-lab.com |
| Cell Observer Konfokalmikroskop mit rotierender Scheibe | Zeiss | Na | |
| Luft | Ucsf | Na | |
| Sauerstoff | Ucsf | Na | |
| Kohlendioxid | Ucsf | Na |
