Intrabronchiale Verabreichung: Eine Technik zur selektiven Verabreichung eines experimentellen Wirkstoffs in eine Mauslunge

Zusammenfassung

Quelle: Liao, S. et. al. Direkte intrabronchiale Verabreichung zur Verbesserung der selektiven Wirkstoffablagerung in der Lunge der Maus. J. Vis. Exp. (2019).

Dieses Video beschreibt einen intrabronchialen Ansatz zur selektiven Verabreichung eines experimentellen Wirkstoffs in die distale rechte und linke Lunge. Im vorgestellten Protokoll werden wir einer Maus intrabronchial Bleomycin verabreichen, um ein besseres Modell für Lungenfibrose zu erhalten.

Protokoll

Alle Verfahren, die Tiere betreffen, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

1. Nicht-operative IB-Intubations- und Verabreichungsansätze

1. IB-Ansatz zur selektiven Labarkanülierung der distalen rechten Lunge
   1. Nach der intratrachealen (IT) Kanülierung (mit der dominanten Hand den verlängerten Katheter über die Mundhöhle in die Luftröhre intubieren) drehen Sie die Kunststoffplatte um +30° (Abbildung 1A).
   2. Halten Sie die Nabe des Katheters fest und führen Sie sie auf natürliche Weise parallel zur Mittellinie der Maus, indem Sie sie auf gewichtsabhängige Tiefen ausdehnen, wie in Tabelle 1.
      beschrieben Anmerkung: Zu beachten ist der Widerstand in diesen Tiefen. Zu diesem Zeitpunkt wird die Maus leicht taktepenisch, wie in den repräsentativen Ergebnissen erläutert. Für einen erfahrenen Bediener werden etwa 90 % der Versuche die rechte Lunge erfolgreich kanülieren (mit Tachypnoe).
   3. Liefern Sie 20 μl 0,3 % Evans-Blau-Farbstoff (EBD, siehe Materialtabelle) mit einer Gelladespitze.
   4. Geben Sie 1–2 Aliquots (je 0,1 ml) Luft mit der Glaspipette ab.
      Anmerkung: Dadurch wird sichergestellt, dass die verbleibende EBD-Lösung (oder experimentelle Wirkstoffe) aus dem Inneren des Katheters entfernt
   werden kann.
   5. Ziehen Sie den Katheter heraus und halten Sie die Mausposition 30 s lang.
   6. Legen Sie das Tier auf eine wärmende Decke, bis es wieder zu Bewusstsein kommt. Die Genesung ist in der Regel innerhalb von 2 Minuten abgeschlossen.
2. IB-Ansatz zur selektiven segmentalen Kanülierung der distalen linken Lunge
   1. Nach der Durchführung der IT-Kanüle (mit der dominanten Hand den verlängerten Katheter über die Mundhöhle in die Luftröhre intubieren) drehen Sie die Kunststoffplatte um -74° (Abbildung 1B).
   2. Halten Sie die Nabe des Katheters fest und üben Sie leichten Druck aus, um den Katheter in den linken Hauptschaftbronchus zu schieben, während Sie einen moderaten Druck sowohl nach unten (90°) als auch in Richtung Buchstütze ausüben. Bei den in Tabelle 1 angegebenen Tiefen sollte der Bediener den Widerstand feststellen, da die unteren Segmente der linken Lunge beansprucht werden. Wenn Tachypnoe auftritt, ziehen Sie den Katheter in die Position von 20 bis 25 mm zurück und versuchen Sie es erneut.
   3. Nach der Kanülierung der linken unteren Lungensegmente ist eine Positionsänderung erforderlich, um eine gravitative Unterstützung für die Verabreichung des Wirkstoffs zu ermöglichen. Drehen Sie die Kunststoffplatte um -30° (Abbildung 1B).
   4. Liefern Sie 40 μl 0,3 % EBD mit einer Gelladespitze.
      Anmerkung: Es ist möglich, ein größeres Volumen des Wirkstoffs zu verabreichen, da die linke Lunge nur einen Lappen hat.
   5. Geben Sie 1–2 Aliquots (je 0,1–0,3 mL) Luft mit den Glastropfern ab.
      Anmerkung: Dadurch wird sichergestellt, dass alle verbleibenden EBDs (oder experimentellen Wirkstoffe) aus dem Inneren des Katheters entfernt werden.
   6. Ziehen Sie den Katheter heraus und halten Sie die Mausposition 30 s lang.
   7. Legen Sie das Tier auf eine wärmende Decke, bis es wieder zu Bewusstsein kommt. Die Genesung ist in der Regel innerhalb von 2 Minuten abgeschlossen.

Ergebnisse

Abbildung 1: Ansatz für die selektive Kanülierung und Verabreichung des Luppchens der rechten/linken Lunge.(A) Um die rechte Lunge zu erreichen, wird die Kunststoffplatte um +30° gedreht, um das selektive Einrasten in den rechten Hauptstammbronchus zu erleichtern. Der Katheter wird vorgeschoben (gemäß den in Tabelle 1 vorge...

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
22 G abgeschirmter IV-Katheter	Bd	381423
Evans blauer Farbstoff	Sigma-Aldrich	Nr. E2129
LED-30W Faseroptik Dual Schwanenhalslicht Mikroskop Beleuchtung	AmScope (Englisch)	LED-30W
Precisionglide-Nadel, 18G x 1"	Bd	305195	Abgeschrägte Spitze, 12 mm Länge