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Methodenartikel
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30. April 2023
Quelle: Hossian, A. K. M. N. et al., Analyse von kombinatorischen miRNA-Behandlungen zur Regulierung des Zellzyklus und der Angiogenese. J. Vis. Exp. (2019).
Dieses Video beschreibt das RNA-Extraktionsprotokoll aus miRNA-transfizierten Lungenkrebszellen. Dieser Ansatz kann verwendet werden, um eine kombinatorische miRNA-Behandlungsaktivität beim Stoppen des Zellzyklus und der Angiogenese zu identifizieren.
>1. miR-143 und miR-506 Transfektion
VORSICHT: Verwenden Sie Latexhandschuhe, eine Schutzbrille und einen Laborkittel, während Sie die beschriebenen Experimente durchführen. Verwenden Sie die Biosicherheitswerkbank bei Bedarf mit eingeschaltetem Schranklüfter, ohne die Atemwege zu blockieren oder den laminaren Luftstrom zu stören. Stellen Sie das Schutzglas immer auf die entsprechende Höhe ein, wie vom Hersteller beschrieben.
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| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| A549 Nicht-kleinzellige Lungenkrebszellen | ATCC | ATCC CCL-185 | |
| Ambion Silencer Negativkontrolle Nr. 1 siRNA | Ambion | AM4611 | |
| has-miR-143-3p miRNA-Nachahmung | Abm | MCH01315 | |
| has-miR-506-3p miRNA-Nachahmung | Abm | MCH02824 | |
| Fötales Rinderserum (FBS) | Fisher Scientific | 10438026 | |
| HyClone Phosphat gepufferte Kochsalzlösung (PBS) | Fisher Scientific | SH30256FS | |
| DMEM 4,5 g/L Glukose, ohne Natriumpyruvat, ohne L-Glutamin | VWR | VWRL0100-0500 | |
| Invitrogen UltraPure DNase/ RNase-freies destilliertes Wasser | Invitrogen | Tel.: 10-977-015 | |
| Quick-RNA-Kits | Zymo-Forschung | Nr. R1055 | |
| Ethanol, absolut (200 proof), molekularbiologische Qualität, | Fisher BioReagenzien | BP2818500 | |
| -80 °C Gefrierschrank | VWR | VWR40086A | |
| Nanotropfen | Thermo Scientific | NanoDrop one C | |
| 96-Well-Platte | CELLTREAT Wissenschaftlich | Tel.: 50-607-511 | |
| Penicillin-Streptomycin 10/10 | Antlanta Biologicals | Nr. B21210 | |
| CO2-Inkubator | Thermo Scientific | HERAcell 150i | |
| dNaSe | Zymo-Forschung | Nr. E1010 | |
| F-12K Nährstoffmischung (Kaighn's Mod.) mit L-Glutamin, Corning | Corning | Artikel-Nr.: 45000-354 | |
| Fötales Rinderserum - Premium | Antlanta Biologicals | Nr. S11150 | |
| Temperaturgesteuerte Zentrifuge Matchine | Thermo Scientific | ST16R | |
| Temperaturgesteuerte Mikrozentrifuge Matchine | Eppendrof | 5415R |
