Antikörper-Microarray: Eine Technik zur Untersuchung der Proteinexpression von miRNA-behandelten Lungenkrebszellen

Abstract

Quelle: Hossian, A. et. al. Analyse kombinatorischer miRNA-Behandlungen zur Regulierung des Zellzyklus und der Angiogenese. J. Vis. Exp. (2019).

Dieses Video beschreibt die Technik zur Untersuchung der Proteinexpression in miRNA-transfizierten Lungenkrebszellen unter Verwendung von Antikörper-Microarrays zur Messung der spezifischen Genexpression. Im vorgestellten Protokoll führen wir Antikörper-Microarrays zur Identifizierung der Aktivität einer kombinatorischen miRNA-Behandlung bei der Stoppung des Zellzyklus und der Angiogenese durch.

Protocol

1. miR-143 und miR-506 Transfektion

VORSICHT: Verwenden Sie Latexhandschuhe, eine Schutzbrille und einen Laborkittel, während Sie die beschriebenen Experimente durchführen. Verwenden Sie die Biosicherheitswerkbank bei Bedarf mit eingeschaltetem Schranklüfter, ohne die Atemwege zu blockieren oder den laminaren Luftstrom zu stören. Stellen Sie das Schutzglas immer auf die entsprechende Höhe ein, wie vom Hersteller beschrieben.

1. NSCLC A549-Zellen in einer T25 cm 2-Kolben-/6/96-Well-Platte in DMEM/F12K-Medien, ergänzt mit 10 % FBS und 1 % Penicillin-Streptomycin (Kulturmedien), in einer Gewebekulturhaube a....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
A549 Nicht-kleinzellige Lungenkrebszellen	ATCC	ATCC CCL-185
Penicillin-Streptomycin 10/10	Antlanta Biologicals	Nr. B21210
Fötales Rinderserum (FBS)	Fisher Scientific	10438026
Antikörper-Array-Assay-Kit, 2 Reaktionen	Vollmond-Biografie	KAS02
Zellzyklus-Antikörper-Array, 2 Objektträger	Vollmond-Biografie	ACC058
ScanArray Express	PerkinElmer		Schritt 2.33: Microarray-Analysesoftware
HyClone Phosphat gepufferte Kochsalzlösung (PBS)	Fisher Scientific	SH30256FS
Thermo Scientific Pierce BCA-Protein-Assay	Thermo Scientific	PI23226