miRNA-Extraktion: Eine Methode zur Extraktion von miRNA aus Plasmaproben

Zusammenfassung

Quelle: Mensah, M. et. al., MicroRNA-basierte Flüssigbiopsie: Die Erfahrungen mit dem Plasma-miRNA-Signatur-Klassifikator (MSC) für die Lungenkrebsvorsorge. J. Vis. Exp. (2017).

MicroRNAs (miRNAs) sind gewebespezifische, kleine, nicht-kodierende RNAs, die die Genexpression regulieren, und könnten ideale Kandidaten für die Früherkennung von Lungenkrebs darstellen. In dem vorgestellten Protokoll werden wir microRNA aus Blutproben von Patienten für die Früherkennung von Lungenkrebs isolieren.

Protokoll

1. Entnahme von Plasmaproben

1. 10 ml Vollblutprobe in Vacutainer-Röhrchen mit Sprühbeschichtung K₂EDTA entnehmen und bei Raumtemperatur lagern.
   Anmerkung: Um die Hämolyse zu minimieren, trennen Sie das Plasma innerhalb von 2 h. Lagern Sie das Vollblut nicht bei niedrigen Temperaturen (z. B. 4 °C), um Temperaturschocks und Zelllyse zu vermeiden, die zu einer unspezifischen miRNA-Freisetzung führen.
2. Innerhalb von 1 h das Plasma durch einen ersten Zentrifugationsschritt bei 1.258 x g und 4 °C für 10 min abtrennen.
3. Den Plasmaüberstand in ein 15-ml-Röhrchen überführen und dabei den Kontakt mit dem Ly....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
1x PBS	Lonza	BE-17-516
20xTE Puffer, pH 8,0	Molekulare Sonde	Nr. T11493	Verdünnen Sie die 20-fache Stammlösung, um die Endkonzentration von 0,1X in nukleasefreiem Wasser zu erreichen
Nukleasefreies Wasser
Maxwell RSC miRNA Gewebe Kit	Promega	Nr. AS1460	Das Kit enthält Homogenisierungslösung, DNase I, Proteinase K, Lysepuffer und Kartuschen. Bei 1-Thioglycerol sollte das Einatmen und der Kontakt mit Haut und Augen vermieden werden. Verwenden Sie es unter einem Abzug.
Vacutainer Safety-Lock Blutentnahme-Set	Becton Dickinson	Artikel-Nr.: 367286-364815
Vortex-Mischer	Velp Scientifica	F202A0173
ThermoMixer T-Schüttler	Euroclone	Nr. A00564	Bringen Sie den Thermomixer auf 37 °C, bevor Sie mit der RNA-Extraktion beginnen
Maxwell RSC Instrument	Promega	AS4500
Kryo-Fläschchen 1,5 ml	Sigma-Aldrich	Z359033

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