3D-DNA-Fisch: Eine Technik zur Lokalisierung eines bestimmten Gens auf einem Chromosom

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Gallerani, G. et.al. Charakterisierung von Tumorzellen mit einem medizinischen Draht zum Einfangen zirkulierender Tumorzellen: Ein 3D-Ansatz basierend auf Immunfluoreszenz und DNA-Fischen. J. Vis. exp. (2017).

Die Isolierung und Charakterisierung zirkulierender Tumorzellen (CTC) aus dem Blut von Krebspatienten ist eine Art nicht-invasiver Flüssigbiopsie und wird mit einem Rückfall und Krankheitsverlauf in Verbindung gebracht. Dieses Video beschreibt die Technik der DNA-Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung (DNA FISH) an CTCs, die auf einem medizinischen Draht eingefangen wurden, um ein spezifisches Gen von Interesse zu untersuchen.

Protokoll

1. 3D DNA-FISH Tag 2

ACHTUNG: Besonderes Augenmerk muss auf die hohe Temperatur der Instrumente und der Feuchtkammer gelegt werden.

Richten Sie den Hybridisierungsofen und den Trockenhitzeschrank ein (~ 3 h vor dem Start des DNA-FISH-Protokolls). Stellen Sie den Hybridisierungsofen auf 75 °C ein, stellen Sie den Trockenheizofen auf 37 °C und kühlen Sie die 0,4× SSC-Lösung (pH = 7,0 ± 0,1) auf 4 °C ab.
Anmerkung: Der pH-Wert von FISH-Puffern ist kritisch und muss 7,0 ± 0,1 betragen.
Waschen Sie den Draht 3 Mal in eiskalter 0,4× SSC-Lösung.
Anmerku....

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Ergebnisse

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Abbildung 1: Funktionalisierter Draht, schematische Anordnung der ALK-Break-Apart-Sonden, Schema der erwarteten Muster der ALK-Umlagerung und spezieller Halter.(a) Rote Kästchen markieren die drei Hauptteile des Drahtes: funktionalisierte Spitze, Drahtstopper und nicht funktionalisierte Spitze. Die funktionalisierte Spitze ist der empfindlichste Teil des Drahtes u.......