Knochenmarkentnahme aus der Hintergliedmaße der Maus

Zusammenfassung

Quelle: Zhu, Y. P., Padgett, et al. Vorbereitung des ganzen Knochenmarks für die Massenzytometrie-Analyse von Zellen der Neutrophilen-Linie. J. Vis. Exp. (2019).

Dieses Video beschreibt ein detailliertes Protokoll zur Isolierung von frischem ganzem Knochenmark aus den Hintergliedmaßen der Maus, um ganze BM-Defekte bei Patienten mit Blutkrankheiten wie Leukämie zu untersuchen.

Protokoll

>1. Ernte von Mausknochenmark (BM)

1. Kaufen Sie C57BL/6J-Mäuse von einem kommerziellen Anbieter. Füttern Sie die Standardnahrung von Nagetieren und halten Sie sie in Mikroisolatorkäfigen in einer pathogenfreien Einrichtung.
2. Verwenden Sie männliche Mäuse im Alter von 6-10 Wochen für Versuchszwecke. Einschläfern durch CO_{2 -}Inhalation, gefolgt von der Gebärmutterhalsluxation.
3. Legen Sie die Maus mit dem Bauch nach oben auf eine sterile Operationsunterlage. Sterilisieren Sie die Haut des Bauches und der Hintergliedmaßen, indem Sie 70% Ethanol sprühen. Verwende eine chirurgische Präparierschere, um die Bauchhöhle aufzuschneiden.
4. Entfernen Sie die Haut, um die Hintergliedmaßen freizulegen. Verwenden Sie eine Verbandszange mit stumpfer Spitze, um das Schienbein der Maus direkt unter dem Knöchel zu halten. Verwenden Sie eine weitere gebogene Abrichtzange, um das Schienbein unter der stumpfen Abrichtzange zu stabilisieren. Brechen Sie das Schienbein und legen Sie den Knochen frei, indem Sie den Muskel mit der stumpfen Verbandszange abreißen.
   Anmerkung: Das Schienbein ist locker am Kniegelenk befestigt und lässt sich mit der Verbandszange mit stumpfer Spitze leicht herausgreifen.
5. Platzieren Sie das Schienbein in kaltes 1x PBS.
6. Bewegen Sie anschließend die stabilisierende gebogene Abrichtzange nach unten zum Oberschenkelknochen. Schieben Sie die Verbandszange mit stumpfer Spitze unter das Kniegelenk und halten Sie die Kniescheibe. Ziehe die Kniescheibe sanft nach oben. Legen Sie den Oberschenkelknochen frei, indem Sie den an der Kniescheibe befestigten Muskel abreißen. Halten Sie den freiliegenden Oberschenkelknochen mit der gebogenen Verbandszange fest und schneiden Sie den Oberschenkelknochen mit einer chirurgischen Präparierschere von der Unterseite des Knochens ab.
7. Legen Sie den Oberschenkelknochen 1x PBS kalt ein.
8. Stanzen Sie mit einer 18-G-Nadel ein Loch in ein 0,5-ml-Mikrozentrifugenröhrchen.
9. Legen Sie sowohl das Schienbein als auch den Oberschenkelknochen in dasselbe 0,5-ml-Mikrozentrifugenröhrchen, wobei das offene Ende der Knochen nach unten zum Loch zeigt.
10. Setzen Sie das 0,5-ml-Röhrchen, das sowohl Tibia als auch Femur enthält, in ein 1,7-ml-Mikrozentrifugenröhrchen ein.
11. Die doppellagigen Röhrchen, die sowohl Tibia als auch Femur enthalten, werden in der Mikrozentrifuge 30 s lang bei 5.510 x g gedreht.
12. Stellen Sie sicher, dass das BM aus den Knochen extrahiert und am Boden des Röhrchens pelletiert wird. Werfen Sie das 0,5-ml-Röhrchen mit den heiligen Knochen hinein. Die Maus BM ist bereit für die nächsten Schritte.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Maus: C57BL/6J	Das Jackson-Labor	Lagernummer: 000664
HyClone Phosphat gepufferte Kochsalzlösung	GE Lifesciences	Kat#SH30256.01