Alle Eingriffe mit menschlichen Teilnehmern wurden in Übereinstimmung mit den institutionellen, nationalen und internationalen Richtlinien für das Wohlergehen des Menschen durchgeführt und vom lokalen institutionellen Prüfungsausschuss überprüft.
1. Knochenmarkaspiration und Probenvorbereitung
- Patienten- und Materialvorbereitung
- Füllen Sie eine oder zwei 10-ml-Spritzen mit 1 % Lidocain mit einer 16-Gauge-Nadel. Ersetzen Sie die Nadel durch eine 21-Gauge-Nadel.
- Geben Sie zwei Tropfen 5% EDTA auf ein Uhrglas.
- Richten Sie Objektträger (n=15 mit einheitlicher Patientennummerierung und Datum) für die Abstrichvorbereitungen ein.
- Bringen Sie den Patienten in die laterale Dekubitusposition. Lokalisieren Sie die hintere Beckenwirbelsäule und markieren Sie sie mit Stift
Anmerkung: Im Allgemeinen befindet sich die hintere Wirbelsäule des oberen Beckens eine Handbreit distal des Beckenkamms und eine Handbreit lateral der Mittellinie. Bei Frauen kann die eigentliche Wirbelsäule etwas seitlicher sein, bei einigen Männern etwas medialer.
- Desinfizieren Sie die Haut mit Chlorhexidin 0,5-1% Ethanol aus dem vorgesehenen Biopsiebereich in Kreisen nach außen.
- Öffnen Sie die Packung mit den sterilen Handschuhen, ziehen Sie die sterilen Handschuhe an und legen Sie die Packung auf den Tisch, um ein steriles Feld zu schaffen. Öffnen Sie die Packung mit der Aspirationsnadel und legen Sie sie auf das sterile Feld.
- Infiltrieren Sie die Haut und das Unterhautgewebe und schließlich das Periost. Am Periost das Lidocain so verabreichen, dass eine Fläche von 1 cm Durchmesser betäubt wurde.
Anmerkung: Die adäquate Verabreichung von Lidocain an das Periost ist einer der wichtigsten Faktoren für den Patientenkomfort. Testen Sie, ob die Knochenhaut ausreichend betäubt wurde, indem Sie mit der eingeführten Nadel auf die vorgesehene Biopsiestelle klopfen, und fragen Sie, ob der Patient Schmerzen verspürt. Zu beachten: Die Kinder werden während des gesamten Eingriffs vollständig betäubt.
- Halten Sie die Aspiratnadel (15 Ga x 2,8") mit dem proximalen Ende in der Handfläche und dem Zeigefinger gegen die Seite des Metallschafts der Nadel in der Nähe der Spitze; diese Position ermöglicht eine bessere Kontrolle.
- Führen Sie die Nadel mit einer rotierenden Bewegung (durch schnell abwechselnde pronierte/supinierende Bewegung) durch die Haut in Richtung der Beckenwirbelsäule ein und bringen Sie die Nadel in Kontakt mit der hinteren Beckenwirbelsäule.
- Stellen Sie sicher, dass die Nadel in den betäubten Bereich des Periosts eingeführt wird; der Patient sollte nur Druck und keine Schmerzen spüren. Wenn der Patient Schmerzen verspürt, positionieren Sie entweder die Nadel neu oder verabreichen Sie mehr Lidocain.
- Schieben Sie die Nadel mit sanftem, aber festem Druck vor, während Sie sie abwechselnd im Uhrzeigersinn und gegen den Uhrzeigersinn drehen. Der Eintritt in die Knochenmarkhöhle wird im Allgemeinen durch einen verminderten Widerstand erkannt.
- Entfernen Sie das Mandrin von der Nadel. Befestigen Sie eine leere 10-ml-Spritze an der Nadel.
- Üben Sie Unterdruck aus, indem Sie den Spritzenkolben mit leichtem Zug zurückziehen. Warnen Sie den Patienten, dass er bei der Knochenmarkabsaugung ein krampfartiges Gefühl und Schmerzen verspüren kann. Wenn nicht genügend Knochenmarknadeln gelöst werden, sollte eine weitere Aspiration mit einem Schnellzug durchgeführt werden. Die meisten Spikulen befinden sich in den ersten 1-2 ml, die aus dem ersten Zug gewonnen werden. Aspirieren Sie nur 1-2 mL, um eine Verdünnung der Probe zu vermeiden.
Anmerkung: Eine Verdünnung führt zu einer Hämodilution und kann die MRD-Ergebnisse verfälschen.
- Entfernen Sie die Spritze und setzen Sie das Mandrin wieder in die Aspirationsnadel ein. Ein Teil des Knochenmarks wird in ein Uhrglas und der Rest in ein mit Heparin beschichtetes 8-ml-Röhrchen ausgestoßen
Anmerkung: Invertieren Sie jedes Röhrchen unmittelbar nach dem Einsetzen des Knochenmarkaspirats in das Probenröhrchen, um eine ausreichende Antikoagulation zu gewährleisten. Die Knochenmarkkoagulation ist oft die Ursache für ungeeignetes Material. Zusätzliches Knochenmark kann von der gleichen Stelle aus aspiriert werden, vorzugsweise wird die Nadel jedoch 5-10 mm vorgeschoben, bevor ein neues Aspirat entnommen wird. Vorzugsweise sollten nicht mehr als 2 Ziehungen pro Einfügeebene genommen werden. Achten Sie darauf, die Röhren mit aufsteigenden Zahlen zu markieren, die für die erste, zweite und/oder aufeinanderfolgende Ziehung stehen. Es ist üblich, die erste Ziehung für die relevanteste diagnostische Analyse zu verwenden.
- Alternativ können Sie die Nadel von der Einstichstelle zurückziehen und einige Millimeter von der ursprünglichen Einstichstelle entfernt wieder in die Markhöhle einführen und den Vorgang wiederholen.
Anmerkung: Aspirieren Sie nicht mehr als 1-2 ml pro Zug, um eine signifikante Blutkontamination zu vermeiden.
- Wiederholen Sie den Vorgang so oft, wie das Material benötigt wird. Wenn genügend Material für das spezifische klinische Studienprotokoll aspiriert wurde, entfernen Sie die Knochenmarknadel.
Anmerkung: Bei langsamen oder anderweitig schwierigen Knochenmarkaspirationen kann die Verwendung von Spritzen hilfreich sein, die mit einem Antikoagulans vorgespült wurden. Im Falle einer trockenen Stichprobe ist eine Trepanbiopsie durchzuführen, die außerhalb des Rahmens dieses Manuskripts liegt.
>2. Vorbereitung von Abstrichen für die morphologische Untersuchung
- Für eine optimale morphologische Beurteilung nehmen Sie aus dem Aspirat im Uhrglas Spikulen (z. B. mit einem Kunststoffspachtel) heraus und legen Sie sie auf einen Objektträger.
- Legen Sie vorsichtig einen weiteren Objektträger mit dem Mark über den Objektträger und schieben Sie ihn vorsichtig, vermeiden Sie jeglichen Druck.
Anmerkung: Nur bei sehr großen Knochenmarknadeln kann leichter Druck ausgeübt werden, um die Dicke der Zellausbreitung zu verringern. Das Verfahren profitiert von der Hilfe eines Assistenten, der die Probenröhrchen handhaben kann. Eine genaue Beschriftung der Eileiter mit der Patientennummer und der Nummer der sequentiellen Knochenmarkentnahme ist entscheidend.
- Trocknen Sie den Objektträger gründlich und führen Sie dann die May Giemsa Grünwald-Färbung durch (siehe Materialtabelle). Unter dem Lichtmikroskop auf Morphologie untersuchen (siehe Abbildung 1).
HINWEIS: Abbildung 1A zeigt die Abstriche von gesundem Knochenmark, die aus verschiedenen funktionellen Zelltypen bestehen, während Abbildung 1B einen AML-Patienten mit überwiegend leukämischen Blasten zeigt. Um die leukämische Restlast besser definieren zu können, muss eine Immunphänotypisierung durchgeführt werden.
