Methodenartikel

Isolierung fluoreszenzmarkierter T-ALL-Zellen: Eine Methode zur Isolierung von T-ALL-Zellen aus adulten Zebrafischen

30. April 2023

In diesem Artikel

Zusammenfassung

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Quelle: Pruitt, M. M., et al. Isolierung der Seitenpopulation bei Myc-induzierter akuter lymphatischer T-Zell-Leukämie im Zebrafisch. J. Vis. Exp. (2017).

Dieses Protokoll beschreibt die Technik, fluoreszenzmarkierte T-Zell-Tumorzellen der akuten lymphatischen Leukämie (T-ALL) aus einem erwachsenen Zebrafisch zu isolieren und sie mit Hilfe des Trypanblau-Farbstoffs zu quantifizieren.

Protokoll

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

>1. Entnahme von fluoreszenzmarkierten T-ALL-Zellen aus dem primären Tumorfisch

  1. Bereiten Sie mindestens 20 ml 10 % hitzeinaktiviertes fötales Rinderserum in 0,9x phosphatgepufferter Kochsalzlösung (FBS/PBS) vor.
  2. Geben Sie 1 ml FBS/PBS in eine Durchstechflasche mit Heparin-Natriumsalz (300 Einheiten).
  3. Wählen Sie Fische aus, die Tumore in mehr als 50 % des Körpers tragen, oder Fische, die Schwierigkeiten beim Fressen oder Schwimmen haben. Opfern Sie die Fische, indem Sie sie mit Tricain überdosieren oder in Eiswasser eintauchen. Bestätigen Sie den Tod durch Mangel an Kiemenbewegung und Herzschlag.
  4. Verwende eine R....

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Offenlegungen

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Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Syngener Zebrafisch (CG2)Siehe Mizgireuv et al., 2006
rag2:c-myc-PlasmidLabor Langenau
rag2:GFP-Plasmid im de Jong Lab konstruiertrag2-Promotor aus dem Labor Langenau
pCS2-Transposase-PlasmidLabor Chien
SteREO Discovery V8 MikroskopCarl Zeiss MikroskopieArtikel-Nr.: 495015-0008-000
Tricain-Methansulfonat (MS-222)Western Chemical, IncFisher Scientific - NC0342409ca. 100 g
Fötales Rinderserum (FBS)HyClone Laboratories, Inc.Fisher Scientific - SH3007103500 mL
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)Gibco von Life TechnologiesNr. 1001-023pH-Wert 7,4 (1x) - 500 mL
Heparin-NatriumsalzSigma-AldrichNr. 2106Fläschchen mit 15 - 300 Einheiten
40 μm MaschenfilterMarke Falcon CorningArtikel-Nr.: 352340Kiste mit 50 Stück
Trypan-BlauSigma LebenswissenschaftenNr. T815420 mL - Lösung (0,4%)

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Schlagwörter

Fluoreszenzmarkierte ZellenTrypanblau F rbungFiltration von ZellsuspensionenWaschung mit Heparin L sungFBS PBS L sungMikrozentrifugenr hrchenZ hlen mit dem H mozytometerGFP markierte Tumorzellen

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