Methodenartikel

Generierung eines PDOX-Mausmodells für Darmkrebs: Untersuchung der Progression von Darmkrebs in einem Mausmodell

30. April 2023

In diesem Artikel

Zusammenfassung

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Quelle: Moret, R. et al. Von Patienten abgeleitete orthotope Xenotransplantatmodelle für menschliches Urothelzellkarzinom und Darmkrebs, Tumorwachstum und spontane Metastasen. J. Vis. Exp. (2019).

Dieses Video beschreibt das Protokoll zur Generierung eines von Patienten abgeleiteten orthotopen Xenotransplantat-Darmkrebs-Mausmodells, um das Fortschreiten von Darmkrebszellen bei nicht-adipösen diabetischen/schweren kombinierten Immundefizienzmäusen (NOD/SCID) zu untersuchen. Dieses Mausmodell hilft beim Verständnis des Primärtumorwachstums und des Metastasenmusters.

Protokoll

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Alle Verfahren, die Tiere betreffen, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Zelllinien kultivieren

  1. Züchten Sie HK-Zellen in vollständigem RPMI-1640-Medium, das mit 10 % fötalem Rinderserum, 2 nM Glutamin, 100 μμl Penicillin G und 100 mg/ml Streptomycin bei 37 °C in einem 5 % CO2 -befeuchteten Inkubator ergänzt wird.
    Anmerkung: HK-Zellen sind normale humane follikuläre dendritische Zellen und können in vitro für ≤ 15 Passagen gezüchtet und expandiert werden.

2. Markieru....

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Offenlegungen

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Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
RPMI-1640 MittelSammlung amerikanischer Schriftkultur110636
IsofluranHenry Schein Tiergesundheit108333
D-Luciferin (150 mg/kg)Perkin Elmer122796
Glutamin (2 nM)Fisher Scientific35050061
Luc/RFP-LentivirusVon unseren Mitarbeitern. Siehe Referenz 13: Gills, J. et al. Ein von Patienten abgeleitetes orthotopes Xenotransplantatmodell, das die Implantation, das Wachstum, die Angiogenese und die Metastasierung des humanen hochgradigen Urothelzellkarzinoms des Blasentumors ermöglicht. Oncotarget. 9, 32718-32729, doi:10.18632/ oncotarget.26024 (2018).
Penicillin/Streptomycin 100 mL (100 U/mL)Fisher ScientificNr. 15140-122
Gas
100% SauerstoffAirgas IncOX USP200
100 % CO2Airgas IncCD USPE
Mäuse
6-8 Wochen alte NOD/SCID-Mäuse (weiblich)Das Jackson-LaborNr. 1303
Werkzeuge
Konisches 15-ml-RöhrchenSarstedtArtikel-Nr.: 11799
150 mm GewebekulturschaleUSA Scientific IncNr. CC7682-3614
ZangeSymmetry Surgical IncTel.: 06-0011
Chirurgische SchereSymmetry Surgical Inc02--2011
Ausrüstung
5% CO2 befeuchteter InkubatorThermo Scientific3110
Biolumineszierendes (BLI) BildgebungsgerätPerkin ElmerCLS136334
BLI Software für bildgebende MaschinenPerkin ElmerCLS136335
Digitaler MessschieberFowler Werkzeuge und InstrumenteTel.: 54-115-330
PräpariermikroskopPräzisionsinstrumente GmbHTel.: Tel.: 504: 228-0076
Isofluran-InduktionskammerPerkin Elmer119038

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Schlagwörter

Patientendeivierter orthotoper XenograftKolorektales Karzinom ModellNOD SCID MausBiolumineszenz ImagingLuciferase markierte ZellenFollikul re dendritische Zellenrektale submukosale InjektionMetastasenanalyseTumorwachstumsstudieimmundefizientes Mausmodell

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