Gründung Primary Adult Fibroblastenkulturen von Nagetieren

Zusammenfassung

Dieser Artikel beschreibt ein Protokoll für die Isolierung und Instandhaltung von Fibroblastenkulturen von Haut-und Lungengewebe von wilden Nagetieren.

Zusammenfassung

Die Bedeutung der Verwendung von primären Zellen, anstatt Krebszelllinien, für biologische Studien wird immer weithin anerkannt. Primäre Zellen sind in Studien der Kontrolle des Zellzyklus, Apoptose bevorzugt, und die DNA-Reparatur, wie Krebszellen Mutationen in Genen, die an diesen Prozessen beteiligt sind. Primäre Zellen kann nicht unbegrenzt durch das Einsetzen der replikativen Seneszenz oder aneuploidization kultiviert werden. Daher müssen neue Kulturen regelmäßig ermittelt werden. Das Verfahren zur Isolierung von Nagetier embryonalen Fibroblasten ist gut etabliert, aber isoliert Erwachsenen Fibroblastenkulturen oft eine Herausforderung. Adult Nagetier Fibroblasten aus Mausmodellen menschlicher Erkrankungen isoliert kann eine bevorzugte gesteuert werden, wenn man sie zu Fibroblasten aus menschlichen Patienten. Darüber hinaus sind erwachsene Fibroblasten die einzige verfügbare Material bei der Arbeit mit wilden Nagetieren, wo schwangere Frauen nicht leicht erhalten werden kann. Hier bieten wir ein Protokoll für die Isolierung und Kultivierung von adulten Fibroblasten von Nagern Haut und Lunge. Wir haben dieses Verfahren erfolgreich an Fibroblasten aus über zwanzig Nagetieren isoliert vom Labor Mäusen und Ratten zu wilden Nagetieren wie Biber, Stachelschwein und Eichhörnchen.

Protokoll

1. Vor dem Start

1. Sterilisieren Schere und Pinzette mit 70% Ethanol.
2. Legen Sie kleine Magnetrührer in einem 30 mL Becherglas mit zwei Lagen Folie, und Autoklaven zu decken.
3. Bereiten Sie eine 28 Wunsch-Einheiten / ml Stammlösung von Liberase Blendzyme 3 in sterilem Wasser. Machen Sie 0,5 ml und bei -20 ° C. Tauwetter ein neues Aliquot vor jedem Einsatz. Die Lösung kann trübe aussehen nach dem Auftauen. Vortex die Lösung, bis es klar wird.
4. Warm up den Zellkulturmedien.

2. Tierische Probenvorbereitung

Achtung: wilde Tiere können Krankheitserreger enthal....

Diskussion

Normale primären Fibroblasten bieten eine hervorragende Alternative zu den etablierten Zelllinien in der biologischen Forschung. Ein wichtiger Vorteil von Fibroblasten ist, dass sie nicht tragen Mutationen in Onkogenen und Tumor-Unterdrücker und pflegen intakten Zellzyklus-Kontrollpunkte. Dies macht normalen Fibroblasten eine bevorzugte System für das Studium der Regulation des Zellzyklus, DNA-Reparatur und Apoptose. Die hier beschriebene Protokoll bietet ein einfaches Rezept für die Isolierung und Wartung von primären .......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
DMEM/F12-Medien	Invitrogen	11330-032
Fötales Rinderserum (FBS), qualifiziert	Invitrogen	01437-036	Das qualifizierte Serum war vorab getestet worden, um ein gutes Wachstum von primären Fibroblasten zu gewährleisten.
Antibiotikum/Antimykotikum	Invitrogen	15420-096
Penicillin/Streptomycin	Invitrogen	15140-122
Liberase TM Research Grade	Roche	05401127001	Ersatzenzym.
Ein Hinweis der Autoren: Da Roche die Produktion von Liberase Blendzyme 3 (11814184001) eingestellt hat, empfehlen sie stattdessen Liberase TM Research Grade mit mittlerer Thermolysin-Konzentration (Art.-Nr. 05401119001 – 10 mg, Art.-Nr. 05401127001 – 100 mg) zu verwenden. Wir haben problemlos auf dieses Enzym umgestellt.
EMEM-Medien	ATCC	30-203	Die von ATCC bereitgestellten EMEM-Medien enthalten bereits nichtessentielle Aminosäuren und Natriumpyruvat.
Gefederter Einweg-Skalpell #21, steril	Mehrere Anbieter
Drei-Gas-Regel-Inkubator	Forma oder Heraeus