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CUBIC-basierte Visualisierung der Proteinexpression: Ein Verfahren zur Visualisierung der Proteinexpression in Hautbiopsien von Mäusen in voller Dicke

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Quelle: Liang, H. et al. CUBIC-Protokoll visualisiert die Proteinexpression mit Einzelzellauflösung in Ganzhautpräparaten. J. Vis. Exp (2016)

Dieses Video beschreibt die CUBIC-basierte Visualisierungstechnik, eine gewebeclearingabhängige Bildgebungstechnik zur visuellen Beurteilung der Proteinexpression in Ganzsitz-Hautbiopsien mit Einzelzellauflösung in 3D. Dieses technisch einfache Protokoll ermöglicht die Visualisierung von Hautproteinen, ohne Hautschnitte vorzubereiten.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Alle Verfahren, die Tiere betreffen, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Vorbereitung des transparenten Maushautgewebes

HINWEIS: Alle Mäuse, die in dieser Studie verwendet wurden, hatten einen genetischen Hintergrund von C57BL/6

  1. Entnahme von Hautgewebe von Mäusen.
    1. Euthanasieren Sie die Mäuse auf humane Weise durch Gebärmutterhalsluxation.
    2. Entfernen Sie vorsichtig mit einem Trimmer Haare von der entsprechenden Hautstelle und achten Sie darauf, die Haut nicht zu verletzen.

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Results

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Abbildung 1: Vorbereitung der Bildgebungskammer. A: Verbrauchsmaterialien, die für die Vorbereitung der Bildgebungskammer benötigt werden, sind Blue Tack, Knetmasse o.ä. und 2 Deckgläser (24 x 50 mm). B: Bereiten Sie zwei dünne Streifen blaues Klebring (Durchmesser ca. 2 mm x 2 cm) und zwei Deckgläser vor. C: Legen Sie blaue Klebestreifen auf ein Deckglas, so dass.......

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
ParaformaldehydSigma-AldrichNr. P6418
Ethanol 96% (unvergällt)Chem-VersorgungUN1170
4',6-Diamidino-2-phenylindol
(DAPI)		Roche10236276001
N,N,N',N'-Tetrakis (2-Hydroxypropyl) ethylendiaminMerck MilliporeArtikel-Nr.: 821940
Polyethylenglykolmono-p-isooctylphenyletherMerck Millipore648462
Triton X-100Merck Millipore648462
SaccharoseSigma-AldrichNr. S0389
Optimale Schnitttemperatur
(OKT) Verbindung		Tissue-TekArtikel-Nr.: 4583
Anti-Keratin14-AntikörperSehenswürdigkeitPRB-155P
Anti-Ki67-AntikörperAbcam (EnglischArtikel-Nr.: ab16667
Esel Anti-Kaninchen Alexa 594LebenstechnologienNr. A21207
DimethylsulfoxidSigma-AldrichNr. D2650
HarnstoffMerck MilliporeArtikel-Nr.: 66612
2,2′,2′'-NitrilotriethanolMerck Millipore137002
Konfokales MikroskopNikon Instruments IncNikon A1 - Konfokales Mikroskop
cruZer6 GesichtstrimmerBraunBraun cruZer6 Gesicht
NatriumazidSigma-Aldrich438456
)

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CUBIC ProtocolProtein ExpressionTissue ClearingConfocal MicroscopyWhole MountSkin BiopsiesAntibody StainingFluorescent Labeling3D ImagingSingle Cell Resolution

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