Visualisierung von Larven segmentalen Nerven in 3 Rd Instar Drosophila Larven Vorbereitungen

Zusammenfassung

Drosophila melanogaster-Larven bieten ein ideales Modellsystem, um die Mechanismen der axonalen Transport innerhalb Larven segmentalen Nerven zu untersuchen. Mit diesem Verfahren können 3 ^rd Larvenstadium, die verschiedene Mutationen zu Wildtyp-Larven verglichen werden.

Zusammenfassung

Drosophila melanogaster ist ein leistungsfähiges Modell für die Untersuchung der Entwicklung und Funktion des Nervensystems, vor allem wegen seiner günstigen Genetik und vollständig sequenzierten Genoms entstehen. Darüber hinaus ist die Larve des Nervensystems ein ideales Modellsystem, um Mechanismen der axonalen Transport Studie als Larven segmentalen Nerven Bündel von Axonen mit ihrem Zellkörper im Gehirn und die Nerven-Terminals endet entlang der Länge des Körpers befindet enthalten. Hier beschreiben wir das Verfahren zur Visualisierung der synaptischen Vesikel Proteine ​​innerhalb Larven segmentalen Nerven. Wenn es richtig gemacht, alle Komponenten des Nervensystems, zusammen mit der dazugehörigen Gewebe wie Muskeln und NMJs, bleiben intakt und unbeschädigt, und bereit, visualisiert werden. 3 ^rd Larvenstadium, die verschiedene Mutationen seziert werden, fest, inkubiert mit synaptischen Vesikel Antikörper, visualisiert und im Vergleich zum Wildtyp-Larven. Dieser Vorgang kann für mehrere verschiedene synaptischen oder neuronalen Antikörpern und Veränderungen in der Verteilung einer Vielzahl von Proteinen angepasst werden können innerhalb von Larven segmentalen Nerven beobachtet werden.

Protokoll

1. Vorbereitung der Reagenzien

1. Bereiten 1x Dissection Buffer mit 128 mM NaCl, 4mm CaCl _2, 4mm MgCl _2, 2 mM KCl, 5 mM HEPES und 36mm Sucrose. PH der Lösung auf 7,2 und Filter zu sterilisieren.
2. Bereiten Sie das Fixiermittel mit 1:1-Verdünnung von 16% Formaldehyd und 1x Dissection Buffer.
3. Bereiten 1x PBT mit 1x Phosphate Buffered Saline (PBS) bei einem pH von 7,2 und Triton X-100 in einer 1:100-Verhältnis.
4. Bereiten Sie 5% Rinderserumalbumin (BSA) mit 0,01% Na in 1x PBS-Azid.

2. Vorbereitung für die Präparation

1. Sylgard Gerichte sind für die Präparation verwendet. ....

Diskussion

Die Drosophila Larve segmentalen Nerven sind ein leistungsfähiges System, Mechanismen in axonalen Transport zu studieren. Wenn die 3 ^rd instar Larven Dissektion korrekt durchgeführt wird, können alle Komponenten des ZNS, PNS, und die damit verbundenen Gewebe, wie die Muskeln und NMJs, innerhalb einer einzigen Larve untersucht werden. Wir haben dieses Protokoll von der von Hurd und Saxton (1996) veröffentlicht angepasst. Dieses Protokoll kann auch angepasst werden andere neuronale Antikörper-Test, son.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Dumont #5 Pinzette	Fine Science Tools	11252-20
Minutien Pins, Edelstahl	Fine Science Tools	26002-10
Mcpherson-Vannas Gerade Klinge 8cm Schere	Fisher Scientific	50822236
Vectashield, Eindeckmedium	Vector Laboratories	H-1000
Sylgard 184 Silikonelastomer	Dow Corning	4026148
Formaldehyd, 16%	Elektronenmikroskopie Sciences	15710
dCSP3	Entwicklungsstudien Hybridombank
Alexa Fluor 568 Ziege Anti-Maus	IgG Invitrogen	A-11004