Stereotaktischer Cisterna magna-Ansatz für die therapeutische Verabreichung in einem Mausmodell

Zusammenfassung

Quelle: Joshi, K., et al. Stereotaktischer chirurgischer Ansatz zur Mikroinjektion des kaudalen Hirnstamms und des oberen zervikalen Rückenmarks über die Cisterna magna bei Mäusen. J. Vis. Exp. (2022)

Dieses Video zeigt den stereotaktischen Ansatz der Cisterna magna für die gezielte Verabreichung an den Hirnstamm und das obere Rückenmark. Durch den Zugang zur mit Liquor gefüllten Cisterna magna ermöglicht dieser Ansatz präzise Injektionen in Bereiche, die mit stereotaktischen Standardmethoden schwer zugänglich sind.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

1. Öffnung der Zisternenmembran

Mit

1. der abgewinkelten Dumont-Pinzette greifen Sie die Dura, die sich vom Hinterhauptbein bis zum Atlas erstreckt. Fassen Sie die Dura in der Nähe des Hinterhauptbeins und bohren Sie mit der Federschere eine kleine Öffnung (~0,5 bis 1,5 mm) in die Dura.
   HINWEIS: An dieser rostralen Stelle ist der Raum zwischen dem Hirnstamm und der darüber liegenden Dura am breitesten und bietet ausreichend Platz für eine sichere Manipulation der Dura.
2. Hebe die Dura mit der Federschere an und öffne sie weiter. Die Größe des Fensters hängt vom Ziel ab.
   HINWEIS: Bei mehrfachen Längsinjektionen oder bilateralen Injektionen ist ein größeres Fenster erforderlich. Ein kleines Fenster ist ausreichend, wenn Sie einzelne einseitige oder mittlere Injektionen vornehmen.
3. Sobald die Dura geöffnet ist, lassen Sie überschüssige Zerebrospinalflüssigkeit mit einer sterilen Queuespitze ab.

2. Identifizierung von Orientierungspunkten und Nullpunkt

1. Betrachten Sie die dorsale Oberfläche des Hirnstamms mit detaillierten Orientierungspunkten durch die offene Dura. Der Obex, der Punkt, an dem der Zentralkanal in den IV-Ventrikel mündet, ist der Standard-anterior-posteriore und mediolaterale Nullpunkt.

3. Injektion des Ziels

1. : Senken Sie die Pipette oder Spritze mit dem stereotaktischen Arm auf das Ziel und injizieren Sie die Lösung wie bei herkömmlichen stereotaktischen Ansätzen. Lassen Sie es 1-5 Minuten nach der Injektion an Ort und Stelle, um eine Nadelspur zu vermeiden, wenn Volumina zwischen 3 und 50 nL verwendet werden. Heben Sie dann die Pipette oder Spritze mit dem stereotaktischen Arm an.
2. Wiederholen Sie Schritt 3.1. für mehrere Ziele.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Abgewinkelte Pinzette, Dumont 5/45	FST	11251-35	Nur zum Greifen dura
Federschere, Vannas 2,5mm mit dazugehöriger Box	FST	15002-08	Schere nur zum Öffnen der Dura, Box zum Anheben des Körpers
Stereotaktischer Mikromanipulator	Kopf	1760-61	Befestigung am Elektrodenhalter zur Positionseinstellung auf der Grundlage von Koordinaten
Stereotaktische U-Rahmenbaugruppe und intrazelluläre Basisplatte	Kopf	1730-B, 1711	Rahmen für die Chirurgie
Sterile Applikatoren mit Wattespitze	Puritan	25-806 10WC	Absorption von Blut aus dem Operationsfeld