Ophthalmologische Wirkstoffverabreichung für nichtinvasive Neuromodulation in einem Mausmodell

Zusammenfassung

Quelle: Zhan, J., et al. Nicht-invasive Strategien zur chronischen Manipulation der DREADD-kontrollierten neuronalen Aktivität. (2019)

Dieses Video zeigt eine nicht-invasive ophthalmologische Verabreichungsmethode zur gezielten Neuromodulation. Das Medikament wird über Augentropfen abgegeben, in den Blutkreislauf aufgenommen, überwindet die Blut-Hirn-Schranke und aktiviert spezifische neuronale Rezeptoren.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

1. Wiederholte Verabreichung von Clozapin-N-oxid (CNO) mit Augentropfen

1. Gewöhnen Sie die Tiere an den Umgang, indem Sie jede Maus 3-4 Tage lang täglich 3-4 Tage lang vor der Verabreichung von Augentropfen behandeln.
2. Löse Clozapin-N-oxid (CNO, 5 mg) in 1 ml steriler 0,9%iger Kochsalzlösung auf (Stammlösung: 5 mg CNO/ml). Bewahren Sie die Lösung bei 4 °C im Kühlschrank auf.
3. Wiegen Sie jede Maus, bevor Sie das Experiment starten, um die Menge an CNO zu bestimmen, die abgegeben werden soll. Verwenden Sie 1-3 μl Tropfen (pro Auge), um 1,0 mg CNO/kg Körpergewicht zu erreichen.
   HINWEIS: Als Beispiel sollte eine 20 g Maus bilaterale (je 2 μl) Augentropfen erhalten.
4. Geben Sie die Augentropfen während der inaktiven (Licht-)Phase von Mäusen ab, 2 h vor dem Ausschalten des Lichts (Zeitgeberzeit (ZT) 10). In Fällen, in denen CNO während der aktiven (dunklen) Phase von Mäusen verabreicht werden muss, stellen Sie sicher, dass schwaches rotes Licht für einen ordnungsgemäßen Umgang mit den Tieren vorhanden ist.
   HINWEIS: Es sollten Vorsichtsmaßnahmen getroffen werden, um eine Störung des zirkadianen (und Hell/Dunkel-) Zyklus von Versuchstieren zu vermeiden.
   1. Mit einer P10-Mikropipette die erforderliche Menge (1-3 μl) CNO-Lösung befüllen, um 1,0 mg CNO/ kg zu erreichen.
      HINWEIS: Verwenden Sie für jeden Augentropfen eine neue und sterile Pipettenspitze. In dieser Reihe von Experimenten wurden bilaterale Augentropfen von CNO durchgeführt; Wenn jedoch eine niedrigere CNO-Konzentration erforderlich ist, können auch einseitige Augentropfen aufgetragen werden.
   2. Lege die Maus über das Genick ruhig.
   3. Stoße die Lösung langsam aus, bis sich ein stabiler Tropfen auf der Pipettenspitze bildet.
   4. Bringen Sie den Tropfen vorsichtig in die Nähe der Hornhaut des Mausauges, bis die Lösung abgegeben wird. Die Pipettenspitze sollte niemals das Auge der Maus berühren.
   5. Lassen Sie die Maus los und setzen Sie sie wieder in ihren Heimatkäfig.
5. Wiederholen Sie diesen Vorgang 5 Tage lang jeden Tag.
   HINWEIS: Diese Dauer kann gemäß den experimentellen Anforderungen angepasst werden.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
BSA	Sigma life science	#A2153-100G	Lyophilisiertes Pulver ≥96% (Agarose-Gelelektrophorese)
C57BL/6J Mäuse	Das Jackson Labor	#000664	männliche Mäuse, 3 Monate alt
Kapillaren	Drummond Wissenschaftliches Unternehmen	#3-000-203-G/X	Außendurchmesser: 1.14 in.
Clozapin-N-oxid	Sigma	#C0832	5mg
Foran	Baxter	#NDC 10019-360-60	Isofluran, USP
Microinjector III	Drummond Scientific Company	#3-000-207	Nanoject III - Programmierbarer Nanoliter-Injektor
Eindeckmedien	Invitrogen	#P36930	Prolong Gold Antifade-Reagenz