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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
Es wurden acht Wochen alte adulte männliche C57BL/6N-Mäuse verwendet.
1. Präoperative Einrichtung
- Stellen Sie sicher, dass ein angemessener Vorrat an autoklavierten, sterilisierten chirurgischen Instrumenten, Geräten, Analgetika und Anästhetika
vorhanden ist.- Sorgen Sie für ausreichend Platz auf einem Operationstisch.
- Bereiten Sie den Operationstisch mit einer windelüberzogenen, maßgeschneiderten chirurgischen Schaumstoffplatte als Bett für die Maus vor. Befestigen Sie ein Wärmekissen mit medizinischem Klebeband, das mit steriler Gaze bedeckt ist, an der Schaumstoffplatte.
- Erstellen Sie Retraktoren, indem Sie eine Akupunkturnadel mit einer Gefäßzange biegen, sie in zwei Hälften falten und dann die Spitze der gefalteten Akupunkturnadel zu einem Haken biegen. Befestigen Sie einen Gummistreifen am Ende der Akupunkturnadel und befestigen Sie das Ende des Gummistreifens mit einer Reißzwecke an der Schaumstoffplatte.
- Kalibrieren Sie das Stereomikroskop; wählen Sie ein Stereomikroskop mit einer angemessenen Fokusentfernung. Decken Sie die Zoom-/Fokustasten mit sterilisierter Aluminiumfolie ab, damit der Chirurg sie während der Operation anpassen kann. Die sterilisierte Aluminiumfolie wurde auf die Zoom-/Fokustasten gelegt, so dass der Chirurg sie mit sterilen Handschuhen bedienen konnte.
2. Mausanästhesie und Vorbereitung
- Wiegen Sie die Maus und betäuben Sie sie entsprechend ihrem Körpergewicht (Isofluran 3%). Stellen Sie sicher, dass die Maus nicht reagiert, wenn die Interdigitalräume ihrer Pfote eingeklemmt werden, um die Narkosetiefe zu bestätigen. Während des gesamten Eingriffs sollte eine angemessene Anästhesietiefe aufrechterhalten werden (1% Isofluran).
- Tragen Sie die Augensalbe beidseitig auf die Augen auf, um eine Reizung oder Austrocknung der Hornhaut während der Operation zu verhindern.
- Bereiten Sie die Operationsstelle vor, indem Sie das Fell an Hals und Brust mit einer automatischen Schermaschine rasieren. Entfernen und reinigen Sie die losen Haare.
- Legen Sie die Maus in Rückenlage auf das mit steriler Gaze bedeckte Wärmekissen. Halten Sie die Temperatur der Maus während des gesamten Vorgangs auf 37 °C. Fixieren Sie die Maus mit medizinischem Klebeband, um die Vordergliedmaßen horizontal abduzieren zu lassen und zu verhindern, dass sich die Hintergliedmaßen und der Schwanz bewegen. Ein sterilisiertes chirurgisches Einwegtuch mit entsprechender Öffnung wurde auf die Mäuse gelegt.
3. Operatives Vorgehen
- Injizieren Sie Tramadol als präventives Analgetikum (20 mg/kg, intraperitoneal oder i.p.). Markieren Sie den Querschnitt am oberen Rand des Schlüsselbeins. Verwenden Sie drei Zyklen von abwechselnden Peelings mit Jodophor-Desinfektionslösung und Ethanol, um die Operationsstelle zu desinfizieren. Bestätigen Sie die Tiefe der Anästhesie mit einer Zehenkneifung vor der Operation.
- Machen Sie unter dem Mikroskop mit einem sterilen Skalpell einen 4 mm großen Querschnitt entlang der Markierung. Vergrößern Sie den Schnitt während des Eingriffs nach Bedarf.
- Präparieren Sie stumpf durch die subkutane Faszie und identifizieren Sie den unteren Rand der Unterkieferdrüse. Ziehen Sie die Unterkieferdrüse nach oben, um die Fossa supraclavicularis und das Brustbein freizulegen.
HINWEIS: In diesem Bereich können sich kleinkalibrige Blutgefäße befinden. Elektrokauter kann verwendet werden, um Blutungen zu stoppen. - Machen Sie einen partiellen Schnitt an der medianen Sternotomie (~4 mm), indem Sie das Brustbein vom Kopf bis zum Schwanz entlang der Mittellinie einschneiden. Schützen Sie die Rippenfelle, das Herz und die Blutgefäße während der Sternotomie.
- Identifiziere den M. sternohyoideus. Ziehen Sie das Brustbein vorsichtig mit zwei kleinen individuell angefertigten Retraktoren aus Akupunkturnadeln und identifizieren Sie den M. sternohyoideus, über die Luftröhre und die Speiseröhre. Ziehen Sie diesen Muskel zurück, um die Halsschlagader, die Vena jugularis interna, den Nervus phrenicus, den Nervus vagus, die Luftröhre und die Speiseröhre freizulegen.
HINWEIS: Ziehen Sie das Brustbein vorsichtig zurück, um einen offenen Pneumothorax zu vermeiden. Anders als beim Menschen befindet sich die Speiseröhre der Maus nicht hinter der Luftröhre, sondern auf der linken Seite neben der Luftröhre. - Identifiziere den linken Plexus brachialis. Ziehen Sie am lateralen Rand der linken Vena jugularis interna die Faszie und das Fettgewebe nach außen, um den Plexus brachialis freizulegen. Halten Sie Ausschau nach dem Stamm superior, der aus dem Nervus cervicalis oder dem Nervus C5 und C6 besteht, der drei Äste hat. Identifizieren Sie den mittleren Rumpf, der aus dem Nervus C7 besteht, und den unteren Rumpf, der aus dem Nervus C8 und dem Nervus thoracica oder T1 besteht, entlang des oberen Rumpfes bis zum Schwanz der Maus.
HINWEIS: Auf der Oberfläche des Plexus brachialis befinden sich longitudinale Blutgefäße. Verwenden Sie Elektrokauter, um Blutungen zu vermeiden. Bei der Abtrennung des linken Plexus brachialis ist der Chylouskanal zu schützen, um eine Chylusfistel zu vermeiden. - Ernten Sie den linken Nerv C7. Präparieren Sie die vordere und hintere Teilung des mittleren Rumpfes (Nervus C7) distal zur Höhe der Teilung zum Rückenmark unter dem Schlüsselbein und blockieren Sie den Nervus C7 mit 0,1 mL 2% Lidocain durch lokale Infusion in den Nervenstamm. Separieren Sie den Nervus C7 mit einer Federschere von Vannas an seinen Verbindungspunkten mit dem Seitenmark und dem hinteren Rückenmark. Schneiden Sie den Nervus C7 so, dass die Länge jeder Teilung ähnlich ist.
HINWEIS: Die vordere und hintere Teilung des Nervus C7 sowie die vordere und hintere Teilung des oberen und unteren Rumpfes verlaufen über eine lange Strecke vor dem Zusammenfluss, so dass der Nervus C7 vor der Resektion ausreichend befreit sein sollte. Tatsächlich ist der Nervus C7 nicht immer in zwei Abteilungen unterteilt; Manchmal ist es in drei Abteilungen unterteilt, in seltenen Fällen sogar in vier. - Die linke C6 Lamina ventralis entfernen. Schützen Sie den Nervus phrenicus vorsichtig und durchtrennen Sie den Musculus scalenus anterior auf Höhe des C6-Segments, um die Nervenwurzel C7 freizulegen. Schneiden Sie mit einer Mikrozange kleine Äste des Nervus C7 ab, die den Musculus paraspinalis innervieren. Ziehen Sie den Nervus C7 vorsichtig heraus und exzitieren Sie vorsichtig die Lamina ventralis C6.
HINWEIS: Zwischen der medialen Seite der linken Halsschlagader und der lateralen Seite der Speiseröhre befindet sich ein knöcherner Vorsprung. Bei diesem knöchernen Vorsprung handelt es sich um die Lamina ventralis des 6. Halswirbels. Der Längsm. des lateralen Randes der Lamina ventralis C6 ist der Musculus scalenus anterior, und der Nervus phrenicus verläuft auf der Oberfläche des Musculus scalenus anterior. - Ernten Sie den richtigen C7-Nerv. Durchtrennen Sie den Musculus scalenus anterior auf der rechten Seite, ähnlich wie auf der linken Seite, und durchtrennen Sie die rechte Nervenwurzel C7 in der Nähe des Foramen intervertebralis. Präparieren Sie den rechten Nervus C7 von seiner Teilungsebene aus.
HINWEIS: Schneiden Sie den rechten Nervus C7 vorsichtig ab, um eine Schädigung der Blutgefäße unter dem Nerv zu vermeiden. - Übertragen Sie den linken Nervus C7.
- Entferne den muskulären Longus colli neben den Wirbelkörpern teilweise auf beiden Seiten. Trennen und erweitern Sie den Raum zwischen Luftröhre und Wirbelkörper stumpf.
- Schicken Sie eine halbgefaltete 5-0-Nylonnaht von der rechten Seite des Wirbelkörpers zur linken Seite durch den präspinalen Weg.
- Koppeln Sie den linken Nerv C7 mit einem Infusionsschlauch an und leiten Sie den Nerv über den präspinalen Weg auf die rechte Seite.
- Ziehen Sie die Luftröhre und die Speiseröhre vorsichtig zurück und koppeln Sie die vordere und hintere Abteilung des linken C7-Nervs ohne Spannung mit 12-0 Nylon-Nähten an die rechte C7-Nervenwurzel. Nähen Sie das Epineurium mit 4-5 Stichen um die Nerven herum, um die Nerven stark zu koaptieren.
HINWEIS: Es ist wichtig, einen Infusionsschlauch aus Kunststoff mit geeigneter Dicke zu wählen. Ein zu dünner Schlauch könnte den Nerv schädigen, und ein zu dicker Schlauch könnte die Luftröhre und die Speiseröhre schädigen. Darüber hinaus ist der Raum zwischen der Luftröhre und dem Wirbelkörper ein "V"-förmiger Raum, und das Durchtrennen eines Teils des muskulären Longus colli kann den Übertragungsweg verkürzen.
4. Wundverschluss
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- Spülen Sie die Wunde mit steriler normaler Kochsalzlösung und trocknen Sie sie mit steriler Gaze.
- Vernähen Sie das Brustbein und schließen Sie die Haut mit 5-0 monofilen Nähten.
5. Postoperative Pflege
- Warten Sie, bis die Maus aus der Narkose erwacht ist. Setzen Sie die Maus in einen sauberen Käfig ohne Einstreumaterial, aber mit einer wärmenden Decke erwärmt. Beobachten Sie die Maus, bis sie gehfähig ist. Verwenden Sie Tramadol (20 mg/kg, i.p.) als postoperatives Analgetikum.
- Setzen Sie die Mäuse in einen Auffangkäfig und überwachen Sie ihn bis zur Genesung. Stellen Sie das Wasser und die Ernährung der Mäuse nach der Operation wieder her. Überwachen Sie die Mäuse postoperativ täglich auf Anzeichen einer Beeinträchtigung oder Infektion, einschließlich Unterernährung, gebeugter Haltung und zerzaustem Fell. Zwei Wochen nach der Operation sollte die Nahtentfernung erfolgen.
HINWEIS: Tragen Sie an drei aufeinanderfolgenden Tagen täglich Erythromycin-Salbe auf die Wundoberfläche auf. - Wenn Komplikationen, wie z. B. Wundödeme, beobachtet werden, sollten diese sofort behoben werden.