Visualisierung cyanobakterieller extrazellulärer Vesikel mittels Transmissionselektronenmikroskopie

Zusammenfassung

Quelle: Biller, S. J., et al. Isolierung und Charakterisierung cyanobakterieller extrazellulärer Vesikel. J. Vis. Exp. (2022)

Dieses Video zeigt die Präparation von extrazellulären Cyanobakterienvesikeln für die Transmissionselektronenmikroskopie durch Negativfärbung, die eine hochauflösende Visualisierung der Vesikelmorphologie, -größe und -reinheit für strukturelle und vergleichende Analysen ermöglicht.

Protokoll

1. Charakterisierung der isolierten Vesikel

1. Führen Sie eine negative Färbungs-Transmissionselektronenmikroskopie durch (siehe Materialtabelle) (TEM - Transmissionselektronenmikroskopie; Partikelgröße, Struktur, Reinheit).
   1. Um die Bildqualität zu verbessern, wird die Oberfläche eines ehemals beschichteten TEM-Gitters mit Hilfe eines Glimmentladungssystems nach den Richtlinien des Herstellers (siehe Materialtabelle) entglichen.
   2. ~5 μl der Vesikelprobe vorsichtig auftragen und 5 Minuten ruhen lassen
      >HINWEIS: Proben mit Vesikelkonzentrationen >10^{9 mL-1} liefern in der Regel die besten Ergebnisse; stärker verdünnte Proben haben nur wenige Vesikel pro Bild.
   3. Entnehmen Sie die Probe, indem Sie den Rand eines Gitters mit einem Stück sauberem Filterpapier berühren.
   4. Pipettieren Sie einen 20-50 μl Tropfen 2 % Uranylacetat (siehe Materialtabelle) auf eine ebene, mit Kunststofffolie bedeckte Fläche und legen Sie das Gitter 2 Minuten lang schwimmend darauf.
   5. Uranylacetat mit Filterpapier entfernen und zum Waschen kurz auf einem Tropfen Reinstwasser schwimmen lassen. Wiederholen Sie die Wasserwäsche ein zweites Mal.
      HINWEIS: Das endgültige Trockengitter ist nach Schritt 1.1.5 bereit für die Visualisierung.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
2% Uranylacetatlösung	Elektronenmikroskopie Sciences	22400-2	Negative Färbung - TEM
Carbon Support Film 200 Mesh, Kupfer. CF200-Cu	Elektronenmikroskopie Sciences	71150	Transmissionselektronenmikroskopie (TEM) Gitter
easiGlow Glow Discharge Reinigungssystem	Ted Pella	91000	Kommerzieller TEM-Gitter-Glimmentleerer
Milli-Q Referenz-Wasseraufbereitungssystem	Merck	Z00QSV0WW	Wasseraufbereitungssystem zur Gewinnung von Reinstwasser vom Typ I
Transmissionselektronenmikroskop	JEOL	JEM-1400	Oder ähnliches Mikroskop