Bewertung von Bakterien-Wirtszell-Interaktionen mit biomimetischen Kügelchen

Abstract

Quelle: Stones, D. H., et al. Biomimetische Materialien zur Charakterisierung von Bakterien-Wirt-Interaktionen. J. Vis. Exp. (2015)

Dieses Video zeigt die Verwendung von bakteriomimetischen Kügelchen zur Quantifizierung der bakteriellen Adhäsion an Wirtsepithelzellen unter kompetitiven Bedingungen. Es beschreibt die Schritte bei der Behandlung der Zellen, ihrer Lyse und der Beschichtung von seriellen Verdünnungen zur Messung koloniebildender Einheiten.

Protocol

1. Messung der bakteriellen Adhäsion
   1. Zu angegebenen Zeitpunkten (z.B. 1 Stunde nach der Infektion) das Medium aus der Zellschicht entfernen.
   2. Waschen Sie die Zellschicht gründlich mit steriler, vorgewärmter phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) (mindestens 3-4 Wäschen à 1 ml PBS), um alle nicht anhaftenden Zellen zu entfernen.
   3. Lysieren Sie die Wirtszellen durch Zugabe von 1 ml einer sterilen 1 % v/v Triton X-100 Lösung in PBS pro Vertiefung. Die Platte bei 37 °C 5 min inkubieren.
   4. Pipettieren Sie jede Probe mehrmals auf und ab, bevor Sie den Inhalt jeder Vertiefung in separate 1,5-ml-Röhrchen übertragen. Bereiten Sie 10-fache serielle Verdünnungen von Proben in steriles PBS vor (z. B. verwenden Sie 100 ml Probe und 900 ml PBS).
   5. 100 μl jeder Probe auf marinen Luria-Bertani (MLB)-Agar auftragen und mit einem Zellstreuer verteilen. Optimieren Sie, welche Verdünnungen je nach Bakterienstämmen und Zeitpunkt plattiert werden sollen.
      Hinweis: Für den beschriebenen Versuchsaufbau ergeben 10-^{, 5}- oder 10-6-fache Verdünnungen eine geeignete Anzahl von koloniebildenden Einheiten (KBE).
   6. Inkubieren Sie die Platten bei 37 °C O/N und zählen Sie die Bakterien durch Koloniezählung.

Materials