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Trennung der Bakterien nach Kapselmenge unter Verwendung eines diskontinuierlichen Dichtegradienten

August 29th, 2025

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Abstract

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Quelle: Feltwell, T., et.al. Trennung von Bakterien nach Kapselmenge unter Verwendung eines diskontinuierlichen Dichtegradienten. J. Vis. Exp. (2019)

Dieses Video zeigt die Verwendung eines diskontinuierlichen Dichtegradienten zur Trennung von Bakterienstämmen basierend auf der Kapselmenge. Durch das Zentrifugieren einer Transposon-Mutantenbibliothek durch den Gradienten lokalisieren sich Bakterien mit unterschiedlichen Kapseldichten in unterschiedlichen Schichten. Die abgetrennten Fraktionen können dann für die nachgelagerte Analyse aufgefangen werden.

Protocol

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Hinzufügen von vorbereiteten Zellen zu Gradienten und Trennung durch Zentrifugation

  1. Geben Sie 600 μl vorbereitete Zellen sehr langsam und ohne Vermischung der Grenzfläche an die Oberseite des Gradienten im Röhrchen.
  2. Legen Sie die Schläuche in Schlauchadapter und wiegen Sie die kombinierten Adapter und Schläuche, um sicherzustellen, dass sie ausbalanciert sind.
    1. Platzieren Sie die Röhrenadapter in einem Festwinkelrotor in einer Tischzentrifuge. 30 min bei 3.000 x g zentrifugieren.
    2. Entfernen Sie nach dem Zentrifugieren vorsichtig die Röhrchen, legen Sie sie in ein geeignetes Gestell und fotografier....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
PercollGE Healthcare17-0891-01
Zentrifuge 5810R mit Rotor A-4-81 und 500ml EimerEppendorf5810 718.007
Adapter für 15 ml RöhrchenEppendorf5810 722.004
Festwinkelrotor F-34-6-38Eppendorf5804 727.002
2,6 - 7 ml RöhrchenadapterEppendorf5804 739.000
Zentrifuge 5424 inkl. Rotor FA-45-24-11Eppendorf5424 000.460
5 ml Polypropylen RundbodenröhrchenFalcon352063

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Tags

Discontinuous Density GradientBacterial Capsule SeparationDensity Gradient CentrifugationCapsule Amount AnalysisTransposon Mutant LibraryBacterial Strain IsolationColloidal Silica GradientFixed Angle RotorBench top CentrifugeDownstream Analysis

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