In vitro bakterielle Transinfektion von T-Zellen durch immunologische Synapsenbildung

Zusammenfassung

Quelle: Cruz-Adalia, A., et al. T-Zellen fangen Bakterien durch Transinfektion aus dendritischen Zellen ein. J. Vis. Exp. (2016).

Dieses Video zeigt bakterielle Transinfektionen durch antigenspezifische T-Zell-dendritische Zell-Interaktionen. Mit Bakterien infizierte dendritische Zellen, die Ovalbumin-Peptid präsentieren, werden mit T-Zellen inkubiert, entweder direkt oder durch eine Membran getrennt. Der direkte Kontakt ermöglicht die Bildung immunologischer Synapsen, die einen Bakterientransfer ermöglichen, während die Membran eine Interaktion verhindert. Die Gentamicin-Behandlung wird dann durchgeführt, um extrazelluläre Bakterien zu eliminieren.

Protokoll

Hinweis: Die Mäuse wurden in spezifisch pathogenfreien (SPF) Gehäusen gezüchtet und von geschultem und qualifiziertem Personal mit der Kohlendioxid (_{CO 2})-Inhalationsmethode euthanasiert.
1. Differenzierung und Infektion von dendritischen Zellen (DCs) aus dem Knochenmark der MausHinweis: Abbildung 1 fasst diesen ersten Schritt zusammen. Alle Eingriffe sollten ab diesem Zeitpunkt in der Haube durchgeführt werden, wobei nur sterile Medien, Instrumente, Pipettenspitzen und Kulturschalen verwendet werden sollten.

1. Differenzierung von DCs, die aus dem Knochenmark der Maus stammen

Ergebnisse

Abbildung 1. Flussdiagramm der DC-Erzeugung und der Isolierung von CD4⁺ T-Zellen. Auf der linken Seite der Abbildung ist der Prozess zur Unterscheidung von dendritischen Zellen (DCs) von Knochenmarkzellen detailliert dargestellt. .......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
RPMI	Fisher Scientific	SH3025501
r-GMCSF	Peprotech	315-03
LPS	SIGMA	L2630-10mg
Na Pyruvat	Thermo Scientific	SH3023901
2-ME	Gibco	31350-010
OVAp OTII (323–339)	GenScript	---
Zellensieb 70uM	BD	352350
30uM Spritze Filcons steril	BD	340598
AutoMacs Klassisch	Miltenyi Biotec	130-088-887
Gentamicin	Normon	624601.6
Transwell (Englisch)	Costar	3415
PFUND	Pronadisa	1231
Agar	Pronadisa	1800
Paraformaldehyd 16%	Elektronenmikroskopie	15710
Triton X-100
CD8-Biot	BD Biowissenschaften	553029
IgM Biot	ImmunoStep (Englisch)	RMM-1 klonen
B220 Biot	BD Biowissenschaften	553086
CD19 biot	BD Biowissenschaften	553784
MHC-II Biot (I-A/I-E)	BD Biowissenschaften	553622
CD11b biot	Immunschritt	11BB-01mg
CD11c biot	Immunschritt	11CB3-01mg
DX5 biot	BD Biowissenschaften	553856
Gr-1 Biot	BD Biowissenschaften	553125
CD16/CD32	ImmunoStep (Englisch)	M16PU-05MG
Anti-Salmonellen	ABD Serotec	8209-4006
CD11cPE	BD Biowissenschaften	553802
CD4-Schützenpanzer	Tonbo Biowissenschaften	Artikel-Nr.: 20-0041-U100
Gr-1 Schützenpanzer	BD Biowissenschaften	553129
MHC-II (I-A/I-E) FITC	BD Biowissenschaften	553623
Alexa-Fluor 647 Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) Antikörper, stark kreuzadsorbiert	Invitrogen	Nr. A-21245
CMAC (7-Amino-4-chlormethylcumarin)	Lebenstechnologien	Nr. C2110
BSA	SIGMA	A7030-100G
Streptavidin-Mikroperlen	Miltenyi Biotec	130-048-101
BD FACSCanto II	BD Biowissenschaften	---