Eine empfindliche visuelle Methode zum Nachweis von Schwefelwasserstoff produzierenden Bakterien

Zusammenfassung

Quelle: Zhu, W., & Chu, W. Empfindliche visuelle Methode zum Nachweis von Schwefelwasserstoff produzierenden Bakterien. J. Vis. Exp. (2022)

Dieses Video zeigt eine empfindliche visuelle Methode zum schnellen Nachweis von Schwefelwasserstoff produzierenden Bakterien. Ein Farbwechsel von gelb zu schwarz deutet auf bakterielle Aktivität durch die Bildung von Wismutsulfid hin.

Protokoll

1. Bakterienstämme

ANMERKUNG: Für dieses Experiment wurden neun Standardstämme verwendet, darunter Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Fusobacterium nucleatum, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa PAO1, Aeromonas hydrophila YJ-1, Proteus vuigaris und Klebsiella pneumoniae. Salmonella paratyphi A, Fusobacterium nucleatum, Pseudomonas aeruginosa und Proteus vuigaris können H₂S produzieren.

1. Vorbereitung der Bakterienkultur
   1. Eine Bakterienkolonie aus Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa PAO1, Aeromonas hydrophila YJ-1 und Klebsiella pneumoniae von einer Luria-Bertani (LB) Agarplatte auf 100 ml LB-Medium übertragen und 12-16 h bei 37 °C kultivieren, bis die Bakterienkonzentration etwa 1 x 10⁹ Zellen/ml beträgt (wie durch OD₆₀₀ angegeben = 1).
   2. Eine Bakterienkolonie von Fusobacterium nucleatum und Proteus vuigaris von Trypticase-Sojabouillon-Agarplatten (TSB) auf 100 ml TSB-Medium überführen und 24 h lang anaerob bei 37 °C kultivieren, bis die Bakterienkonzentration etwa 1 x 10⁹ Zellen/ml beträgt (wie durch OD₆₀₀ = 1 angegeben).

2. H2S-Nachweis-Assay

1. Test zur Herstellung von Schwefelwasserstoff
   1. Mischen Sie 100 μl Bakterienkultur mit 100 μl neu hergestellter Wismutlösung (pH 8,0; 10 mM Wismut(III)-chlorid, 0,4 M Triethanolamin-HCl, 20 mM Pyridoxal-5-Phosphat-Monohydrat, 20 mM EDTA (Ethylendiamintetraessigsäure) und 40 mM L-Cystein) in den 96-Well-Mikrotiterplatten und kulturieren Sie sie 20 Minuten lang bei 37 °C. Führen Sie die Analyse für jeden Bakterienstamm in dreifacher Ausfertigung durch.
   2. Nach 20 Minuten auf Farbveränderung prüfen. Ändert sich die Farbe der Lösung von hellgelb zu schwarz, deutet dies darauf hin, dass das Bakterium in der Lage ist, H₂S zu produzieren. Wiederholen Sie diese Messung 3x.
2. Sensitivität der Methode
   1. Bestimmen Sie die Empfindlichkeit der Methode unter Verwendung verschiedener Konzentrationen von Natriumhydrosulfid (NaHS): 2 mM, 1 mM, 0,8 mM, 0,6 mM, 0,4 mM, 0,2 mM, 0,1 mM und 0 mM, gemischt mit BS-Lösung (Wismutsulfid).
   2. Bestimmen Sie das Vorhandensein von HS⁻/S²⁻ , indem Sie die Bildung eines schwarzen BS-Niederschlags beobachten. Bewerten Sie die Farbe der Wells mithilfe einer visuellen Skala von keiner Farbproduktion (-) bis zur dunkelsten schwarzen Farbproduktion (++++++).

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Wismut(III)-chlorid	Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd	7787-60-2
EDTA	Nanjing Chemisches Reagenz Co., Ltd	60-00-4
Fusobacterium nucleatum	ATCC	25586
L-Cystein	Amresco	52-90-4
Triethanolamin-HCl	Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.	637-39-8
Natriumhydrosulfid
Pipette