Fluoreszenz-Zeitraffer-Bildgebung des Lebenszyklus von Streptomyces venezuelae

Zusammenfassung

Quelle: Schlimpert, S. et al. Fluoreszenz-Zeitraffer-Bildgebung des kompletten Lebenszyklus von S. venezuelae mit einem mikrofluidischen Gerät. J. Vis. Exp. (2016)

Dieses Video zeigt die Fluoreszenz-Zeitraffer-Bildgebung des gesamten Lebenszyklus des Bakteriums Streptomyces venezuelae mit einem mikrofluidischen Gerät, um die Keimung, das Hyphenwachstum und die Sporulation in Echtzeit zu visualisieren.

Protokoll

1. Aufbau des Mikroskops und des Zeitrafferprotokolls

Anmerkung: Diese Methode wurde an einem vollmotorisierten und automatisierten inversen Weitfeldmikroskop implementiert, das mit einer sCMOS-Kamera, einer Halogen-Metalldampflampe, einem Hardware-Autofokus, einer Tischhalterung für 96-Well-Platten und einer Klimakammer ausgestattet ist.

1. Heizen Sie die Klimakammer vorher auf 30 °C vor, um Probleme mit dem Autofokus nach dem Start des Experiments zu vermeiden. Der Zeitaufwand hängt von der verwendeten Klimakammer, dem Mikroskop und dem Heizsystem ab. Beginnen Sie am Abend vor dem Experiment mit dem Aufheizen des Systems.
2. Schalten ....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
B04A CellAsic ONIX Platte für Bakterienzellen	Merck-Millipore	B04A-03-5PK	Mikrofluidische Kulturplatten
CellAsic ONIX Mikrofluidisches Perfusionssystem und ONIX FG (Version 5.0.2)	Merck-Millipore	EV-262	Die aktuelle ONIX-Ausgabe (Juli 2015) und eine Anleitung zur Nutzung des Programms finden Sie hier: http://www.merckmillipore.com
Axio Observer.Z1 Mikroskop	Zeiss	431007-9902-000	Vollautomatisches und motorisiertes inverses Weitfeldmikroskop
Brutkasten XL multi S1 mit Temperaturmodul S1 und Heizgerät XL S2	Zeiss	411857-9061-000	Klimakammer, die das Mikroskop umgibt
Plan-Apochromat 100x/1,46 Öl DIC Objektiv	Zeiss	420792-9800-000
Ocra FLASH 4 V2	Hamamatsu Photonics K.K.	Nr. C11440-22CU
Beleuchtung HXP 120V	Zeiss	423013-9010-000
FL Filterset 46 HE YFP schaltfrei	Zeiss	489046-9901-000	Fluoreszenzfilter-Set, Anregung 500/25 nm, Emission 535/30 nm
FL Filterset 63 HE RFP schaltfrei	Zeiss	489063-0000-000	Fluoreszenzfilter-Set, Anregung 572/25 nm, Emission 629/30 nm
Montagerahmen K-M für Multiwell-Platten	Zeiss	000000-1272-644	Tischhalter für mikrofluidische Platte
ZEN pro 2012	Zeiss	410135-1002-120	Steuerungssoftware für Mikroskope
ZEN-Modul Zeitraffer	Zeiss	410136-1031-110	Softwaremodul zum Einrichten von Zeitraffermikroskopie-Experimenten
Kacheln/Positionen des ZEN-Moduls	Zeiss	410136-1025-110	Softwaremodul zum Speichern bestimmter Tischpositionen (xzy)
Fidschi	Open-Source-Softwarepaket	http://fiji.sc/Fiji	Generierung von Zeitrafferfilmen
PBS (phosphatgepufferte Kochsalzlösung)	Sigma	P4417-100TAB	Wird zum Nachfüllen von Einlaufmulden von ungenutzten Bahnen in B04A-Platten verwendet, um die Platte für die kurzfristige Lagerung vorzubereiten.
SV60	John Innes Centre Stamm Sammlung		S. venezuelae-Stamm , der divIVA-mcherry und ftsZ-ypet exprimiert