Dieses Video zeigt das Verfahren zur Analyse des Schwarmverhaltens von Pseudomonas aeruginosa , indem das Bakterienwachstum von einer zentralen Kultur zu Satellitenspots beobachtet wird, die dieselbe Kultur mit einem Antibiotikum mischen, unter Verwendung eines Agarplatten-Setups und Zeitraffer-Bildgebung.
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Methodenartikel
Schwarmverhalten von Pseudomonas aeruginosa unter Antibiotikabelastung
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26. September 2025
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Protokoll
1. Wachstum von P. aeruginosa und Beschichtungsbedingungen
- Bereiten Sie 400 mL Lysogeny-Bouillon (LB) zu, indem Sie 10 g LB-Miller-Pulvermischung zu 400 mL ddH2O hinzufügen. Fügen Sie weitere 8 g Agar für 2%ige LB-Agar-Petrischalen hinzu. Autoklav zum Sterilisieren.
- Gießen Sie 20 ml geschmolzenes LB-Agar-Medium in Petrischalen mit einem Durchmesser von 10 cm und lassen Sie sie über Nacht bei Raumtemperatur erstarren. Lagern Sie das flüssige Medium bei Raumtemperatur und die Agarplatten bei 4 °C.
- Streifen Sie P. aeruginosa auf einer LB-Agar-Petrischale aus einer gefrorenen Brühe, die bei ....
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Ergebnisse
Abbildung 1: Schematische Darstellung des P. aeruginosa-Schwarmassays und der kollektiven Stressreaktion. (A) P. aeruginosa-Zellen werden über Nacht (16–18 h bis OD600
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Reagenzien | |||
| Bacto-Agar, dehydriert | BD Difco | 214010 | Für LB-Agar-Platte und Schwarm-Agar-Platte |
| Casaminosäuren | BD Difco | 223050 | Für Schwarmmedien |
| D-Glukose | Fisher Chemical | Nr. D16500 | Dextrose. Für Schwarmmedien |
| Fosfomycin-Dinatriumsalz | Chemische Industrie in Tokio | Nr. F0889 | Stammkonzentration: 200 mg / ml. Gelöst in ddH₂O |
| Gentamycinsulfat | Sigma-Aldrich | Nr. G1914 | Stammkonzentration: 3 mg / ml. Gelöst in ddH₂O |
| Kanamycinsulfat | Sigma-Aldrich | 60615 | Stammkonzentration: 100 mg / ml. Gelöst in ddH₂O |
| LB-Müller | BD Difco | 244620 | Für LB-Bouillon und LB-Agar-Platten |
| Magnesiumsulfat-Heptahydrat | Sigma-Aldrich | 230391 | Für Schwarmmedien |
| Stämme | |||
| Pseudomonas aeruginosa | Siryaporn Labor | Nr. AFS27E.118 | PA14-Stamm |
| Vorräte | |||
| Aluminiumoxid-Schleifpapier | 3M | 150 Geldstrafe | Für schwarze Deckel |
| Schwarzer Stoff | Joann | PRD7089 | Schwarzer Stoff |
| Schwarze Sprühfarbe | Krilon | 5592 Mattschwarz | Für schwarze Deckel |
| Erlenmeyerkolben | Kimax | 26500 | 250 mL |
| Vorratsflaschen aus Glas | Pyrex | Artikel-Nr.: 13951L | 250 mL, 500 mL, 1000 mL |
| 8 Zoll Kabelbinder | Gardner Bender | E173770 | Zum Anbringen von schwarzem mattem Stoff |
| Petrischalen (100 mm x 15 mm) | Fischer | FB0875712 | 100 x 15 mm Polystyrolplatten |
| Holzstäbchen | Fischer | 23-400-102 | Zum Schlieren und Impfen von Bakterien |
| Ausrüstung | |||
| Autoklav | Markt Schmiede Branchen | STM-E | Zum Sterilisieren von Reagenzien |
| 25 mL Pipette | USA Scientific, Inc. | 1072-5410 | Zum Pipettieren von 20 mL für Schwarmagarplatten |
| Luftentfeuchter | Frigidaire | FAD704DWD 70-Pint | Zur Aufrechterhaltung einer relativen Luftfeuchtigkeit im Raum von ca. 45 % |
| Brutkasten | VWR | 89032-092 | Für das Wachstum von Bakterien bei 37 °C |
| Isotemp Wasserbad | Fischer | Artikel-Nr.: 15-462-21Q | Zum Kühlen von Medien bis 55 °C |
| Laminar-Flow-Haube | Die Bäckerfirma | Nr. SG603A | Zum Trocknen von Platten |
| P-20 Pipette | Gilson | F123601 | Fleckenbildung auf schwärmenden Agarplatten |
| Pipettier-Controller | BrandTech (Englisch) | Akku-Düse | Zum Pipettieren von 20 mL für Schwarmagarplatten |
