Ein neues chromogenes Medium für den schnellen Nachweis von Vibrio-Spezies

Zusammenfassung

Quelle: Yeung, M., et al. Entwicklung eines empfindlicheren und spezifischeren chromogenen Agarmediums für den Nachweis von Vibrio parahaemolyticus und anderen Vibrio-Spezies . J. Vis. Exp. (2016)

Dieses Video zeigt eine kulturbasierte Methode zur Identifizierung von Vibrio-Spezies , wobei chromogener Agar als genauere Alternative zu den häufig verwendeten Thiosulfat-Citrat-Gallensalzen-Saccharose oder TCBS-Agar hervorgehoben wird. Chromogener Agar bietet eine überlegene Differenzierung von Vibrio-Stämmen , indem er speziesspezifische enzymatische Aktivitäten nachweist.

Protokoll

Wachstum bei selektiven und differentiellen Medien

1. Zwei bis vier Tage vor dem Experiment werden alle mikrobiellen Stämme zur Isolierung der Kolonie auf nichtselektives Medium (TSAS, BHI oder Schokoladenagar) gestreift. Inkubieren Sie die Platten bei 35-37 °C für 48 Stunden. Überprüfen Sie die Reinheit der Kulturen, indem Sie die Morphologie der Kolonie nach der Inkubation beobachten. Reinkulturen sollten Kolonien hervorbringen, die eine ähnliche Koloniemorphologie aufweisen.
2. Übertragen Sie einige isolierte Bienenvölker in 5 ml Brühe. Die Röhrchen bei 35-37 °C 16-24 Stunden inkubieren.

ANMERKUNG: Verwenden Sie in allen Versuchen junge Völker, die weniger als vier Tage alt sind, um Übernachtkulturen herzustellen.

3. Streichen Sie eine Schleife voller Übernachtkulturen auf selektiven und differentiellen Medien (TCBS und chromogenem Agar) zur Isolierung der Kolonie. Inkubieren Sie die Platten bei 35-37 °C für bis zu 96 Stunden.
4. Erfassen Sie das Gesamtwachstum aller Stämme, indem Sie sowohl die Kulturdichte auf der Platte als auch die Größe der isolierten Kolonien untersuchen. Erfassen Sie die Farbe von Kolonien unter Umgebungs- und/oder UV-Licht. Beachten Sie andere Merkmale der isolierten Kolonie, wie z. B. die Höhe, den Rand und die Form.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Reagenz/Ausrüstung
Agar	Fisher Scientific	DF0140-15-4	kann auch andere Marken verwenden
BHI-Pulver	Fisher Scientific	DF0418-17-7	kann auch andere Marken verwenden
CampyGen Gasgenerator	Hardy Diagnostik	CN035A	um eine mikroaerophile Atmosphäre zu schaffen; kann auch andere Marken verwenden
Schokoladen-Agar-Platten	Hardy Diagnostik	E14	kann auch andere Marken verwenden
Kulturröhren	Fisher Scientific	Nr. S50712	kann auch andere Marken verwenden
HardyChrom Vibrio Agarplatten	Hardy Diagnostik	G319	Diese Studie evaluiert dieses Medium
Brutkasten	Jegliche
Impfösen	Fisher Scientific	22-363-606	In dieser Studie wurde eine Größe von 10 Mikrolitern verwendet
Petrischale	Fisher Scientific	FB0875713	kann auch andere Marken verwenden
Pipette und Tipps	Alle sterilisierten Spitzen
TCBS-Pulver	Hardy Diagnostik	265020	Diese Studie evaluiert dieses Medium
TSB-Pulver	Fisher Scientific	DF0370-07-5	kann auch andere Marken verwenden
UV-Sichtschrank	Jegliche		Langwelliges UV-Licht emittieren
Wasserbad	Jegliche
Bakterienarten und -stämme
Aeromonas hydrophila	ATCC
Candida albicans	ATCC
Campylobacter jejuni	ATCC
Escherichia Coli	ATCC
Proteus mirabilis	ATCC
Pseudomonas aeruginosa	ATCC
Staphylococcus aureus	ATCC
Salmonellen choleraesuis	ATCC
Shigella boydii	ATCC
Shigella flexneri	ATCC
Shigella sonnei	ATCC
Vibrio alginolyticus	ATCC
V. cholerae (Serotypen umfassen O139, O1, Nicht-O1, El Tor-Biovar)	FDA, ATCC
V. Damsela	FDA
V. Fischerei	Umwelt
V. fluvialis	CDC
V. furnissii	CDC
V. hollisae	FDA
V. metschnikovii	ATCC
V. mimicus	FDA
V. parahaemolyticus (Serotypen umfassen O3:K6, O1:K56, O4:K8, O5:K15, O8 usw.)	ATCC, FDA, CDC, Umwelt
V. proteolyticus	FDA
V. vulnificus	FDA