Mikrobiologisch induzierte Calcitfällung durch Sporosarcina pasteurii

Zusammenfassung

Quelle: Bhaduri, S., et al., Mikrobiologisch induzierte Calcitfällung vermittelt durch Sporosarcina pasteurii. J. Vis. Exp. (2016)

Dieses Video zeigt die Methode der Anreicherung von Sporosarcina pasteurii mit Harnstoff und Calciumchlorid, um die Ureaseaktivität auszulösen, was zur Bildung von sichtbaren Calcitkristallen durch mikrobiologisch induzierte Calcitfällung (MICP) führt.

Protokoll

1. Protokoll zur Anreicherung von Nährstoffen zur Beschleunigung der Ausfällung

1. 9 ml der vorbereiteten Kulturflüssigkeit (Zellen + Medium) werden in mehrere sterilisierte Zentrifugenröhrchen mit einem Volumen von jeweils 10 ml überführt.
2. Bereiten Sie eine 100-ml-Stammlösung der externen Anreicherung vor, die aus vier Komponenten in den folgenden Konzentrationen in frischem Medium besteht: Harnstoff: 2 g/L, Ammoniumchlorid: 1 g/L, Natriumbicarbonat: 212 mg/L, Calciumchlorid: 280 mg/L. Messen Sie alle Bestandteile sorgfältig mit einer Analysenwaage ab und mischen Sie alle außer Harnstoff mit frischem Medium in einem Becherglas und stellen Sie es in den Autoklaven (121 °C, 15 psi, 15 min).
   1. Nach dem Autoklaven wird die erforderliche Menge Harnstoff (2 mg) mit 1 ml frischem Medium gemischt und durch eine Spritze geführt, die mit einem 0,22-μm-Spritzenvorsatzfilter ausgestattet ist, um den Anreicherungsprozess abzuschließen.
   2. 1 ml dieses Anreicherungsmediums mit Additiven werden in die sterilisierten Zentrifugenröhrchen gegeben, die 9 ml der vorbereiteten Kulturflüssigkeit (Zellen + Medium) enthalten.
      ANMERKUNG: Harnstoff ist bei erhöhten Temperaturen abbaubar und kann nicht in einem Autoklaven sterilisiert werden. Nach dem Autoklavieren der anderen Komponenten (121 °C, 15 psi, 15 min) wird der Harnstoff zuletzt durch einen 0,22 μm Spritzenfilter zugegeben.
3. Wirbeln Sie jedes Rohr gründlich mit einem mechanischen Vortexer auf. Stellen Sie die angereicherten Flüssigkeiten (Zellen + Medium + Additive) in einen schüttelfreien Inkubator bei 30 °C. Überwachen Sie alle Geräte regelmäßig auf den Beginn der Ausfällung. Beginnen Sie mit einem Lichtmikroskop mit mikroskopischen Beobachtungen, sobald der Beginn des Niederschlags mit bloßem Auge erkannt wurde. Dies ist in der Regel zwischen 30 - 36 Stunden nach Beginn der Experimente.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Pyrex-Kolben	Fisher Scientific	Nr. S63268	Corning Erlenmeyer
Messzylinder	Cole-Parmer	CP08559GC	Cole-Parmer Klasse A Messzylinder mit Cal Cert,TC; 1000 mL,1/Pk
Analytische Waage	OHAUS	AX124E	Wird verwendet, um das Gewicht von Reagenzien zu messen
Autoklav	Brinkmann	58619000
Klebeband für Autoklaven	VWR	52428864
Alufolie	Sigma-Aldrich	Z185140	Wird verwendet, um den Kolben zu versiegeln, bevor er in den Autoklaven gestellt wird
Bakterien-Bestand	Zedernlan	11859	-80°C Bestand an S. pasteurii, ATCC-Nr. wird gegen Kat. Nein.
Mline mechanische Einkanalpipetten, variables Volumen	Biohit	725010	Vermarktet von VWR unter der Katalognummer 14005976
Spitze für Mikropipetten	Fisher Scientific	Artikel-Nr.: 212772B	Wird zum Kratzen von Agarplatten verwendet
Brutkasten	Bindemittel	80079098	Mikrobiologie-Inkubator, BF-Serie
Inkubator zum Schütteln	VWR	14004300	VWR Signature Tisch-Schüttel-Inkubatoren
Parafilm	Sigma-Aldrich	Nr. P7793	Wird zum Versiegeln von Agarplatten verwendet
Harnstoff	Sigma-Aldrich	U1250	Anreicherung für Nährmedium
Natriumbicarbonat	Sigma-Aldrich	Nr. S8875	Anreicherung für Nährmedium
Calciumchlorid	Sigma-Aldrich	Nr. C1016	Anreicherung für Nährmedium