Visualisierung der bakteriellen Motilität mit Hilfe von Redoxfarbstoff-supplementiertem halbfestem Medium

Zusammenfassung

Quelle: Chu, W. und Zhuang, X. Visualisierung der bakteriellen Motilität basierend auf einer Farbreaktion. J. Vis. Exp. (2022)

Dieses Video zeigt einen auf Redoxfarbstoffen basierenden halbfesten Agar-Assay zur Beurteilung der bakteriellen Motilität durch visuelle Unterscheidung von beweglichen und nicht-beweglichen Stämmen.

Protokoll

Bakterienstämme

ANMERKUNG: Achtzig Stämme wurden aus der aquatischen Umwelt isoliert und mit einem automatisierten Instrument zur Identifizierung von Bakterien identifiziert (siehe Materialtabelle), darunter Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp., Vibrio spp. , Klebsiella pneumoniae und Aeromonas hydrophila (Tabelle 1). Staphylococcus aureus (siehe Materialtabelle) wurde als negative unbewegliche Kontrolle verwendet; Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa und Salmonella typhimurium (siehe Materialtabelle) wurden als positive Kontrollstämme verwendet.

1. Identifizieren Sie Testbakterienstämme, die für die Motilitätsanalyse verwendet werden sollen.
2. Beziehen Sie negative unbewegliche Kontrollen und bewegliche positive Kontrollstämme ein.

TTC-verstärkte Beobachtung der bakteriellen Motilität

1. Einzelne Kolonien von Testbakterien werden aus Agarplatten entnommen und mit TTC (2,3,5-Triphenyltetrazoliumchlorid) in das halbfeste Medium inokuliert, indem sie mit Impfnadeln punktiert werden.
2. Kulturieren Sie die Röhrchen bei 37 °C im Inkubator für 24-48 Stunden, um die Ergebnisse zu beobachten.
3. Beobachten Sie den Wachstumszustand: Kennzeichnen Sie die Bakterien als unbeweglich (-), wenn nur die Einstichlinie rot ist. Kennzeichnen Sie die Bakterien als beweglich (+), wenn sich die rote Farbe entlang der Einstichlinie leicht nach außen ausbreitet.

Tabelle 1: Vergleich der bakteriellen Motilität.

Dehnung		Halbfestes Medium mit 0,4 % Agar		Halbfestes Medium mit 0,4 % Agar und 0,005 % TTC
		24 h	48 Std.	24 h	48 Std.
P. aeruginosa ATCC27853		+	+	+	+
E. coli ATCC25922		+	+	+	+
S. typhimurium ATCC14028		+	+	+	+
S. aureus ATCC25923		-	-	-	-
E. coli (15)		12	14	13	14
Salmonella spp. (8)		7	8	8	8
A. hydrophila (20)		18	20	20	20
Vibrio spp. (8)		7	8	8	8
P. aeruginosa (24)		18	20	22	23
K. pneumoniae (5)		-5	-5	-5	-5
Die Zahlen geben die Anzahl der positiven Stämme (+) und negativen Färbungen (-) an.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Bacto Agar	Difco
Escherichia Coli	ATCC	ATCC25922	Positive Kontrolle
Pseudomonas aeruginosa	ATCC	ATCC27853	Positive Kontrolle
Staphylococcus aureus	ATCC	ATCC25923	Negative unbewegliche Kontrolle
Tryptose	OXOID
TTC (2,3,5-Triphenyl-tetrazoliumchlorid)	Sigma	298-96-4
Automatisiertes mikrobielles Identifizierungssystem VITEK 2	Bio Mérieux