Dieses Video zeigt einen auf Redoxfarbstoffen basierenden halbfesten Agar-Assay zur Beurteilung der bakteriellen Motilität durch visuelle Unterscheidung von beweglichen und nicht-beweglichen Stämmen.
ANMERKUNG: Achtzig Stämme wurden aus der aquatischen Umwelt isoliert und mit einem automatisierten Instrument zur Identifizierung von Bakterien identifiziert (siehe Materialtabelle), darunter Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp., Vibrio spp. , Klebsiella pneumoniae und Aeromonas hydrophila (Tabelle 1). Staphylococcus aureus (siehe Materialtabelle) wurde als negative unbewegliche Kontrolle verwendet; Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa und Salmonella typhimurium (siehe Materialtabelle) wurden als positive Kontrollstämme verwendet.
Identifizieren Sie Testbakterienstämme, die für die Motilitätsanalyse verwendet werden sollen.
Beziehen Sie negative unbewegliche Kontrollen und bewegliche positive Kontrollstämme ein.
TTC-verstärkte Beobachtung der bakteriellen Motilität
Einzelne Kolonien von Testbakterien werden aus Agarplatten entnommen und mit TTC (2,3,5-Triphenyltetrazoliumchlorid) in das halbfeste Medium inokuliert, indem sie mit Impfnadeln punktiert werden.
Kulturieren Sie die Röhrchen bei 37 °C im Inkubator für 24-48 Stunden, um die Ergebnisse zu beobachten.
Beobachten Sie den Wachstumszustand: Kennzeichnen Sie die Bakterien als unbeweglich (-), wenn nur die Einstichlinie rot ist. Kennzeichnen Sie die Bakterien als beweglich (+), wenn sich die rote Farbe entlang der Einstichlinie leicht nach außen ausbreitet.
Tabelle 1: Vergleich der bakteriellen Motilität.
Dehnung
Halbfestes Medium mit 0,4 % Agar
Halbfestes Medium mit 0,4 % Agar und 0,005 % TTC
24 h
48 Std.
24 h
48 Std.
P. aeruginosa ATCC27853
+
+
+
+
E. coli ATCC25922
+
+
+
+
S. typhimurium ATCC14028
+
+
+
+
S. aureus ATCC25923
-
-
-
-
E. coli (15)
12
14
13
14
Salmonella spp. (8)
7
8
8
8
A. hydrophila (20)
18
20
20
20
Vibrio spp. (8)
7
8
8
8
P. aeruginosa (24)
18
20
22
23
K. pneumoniae (5)
-5
-5
-5
-5
Die Zahlen geben die Anzahl der positiven Stämme (+) und negativen Färbungen (-) an.
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