Mikrofluidische Strukturierung und fluoreszenzbasierte Verfolgung des einzelligen Bakterienwachstums

Abstract

Quelle: Pioli, R., et al., Strukturierung von Mikroorganismen und Mikropartikeln durch sequentielle Kapillaritäts-unterstützte Assemblierung. J. Vis. Exp. (2021)

Dieses Video zeigt die Methode zum Einfangen einzelner fluoreszenzmarkierter Escherichia coli (E. coli)- Zellen in mikrofluidischen Fallen unter Verwendung einer kohlenstofffreien Suspension und eines kontrollierten Flusses, gefolgt von einer Nährstoffzugabe zur Auslösung des Wachstums und der Fluoreszenzbildgebung von Mikrokolonien.

Protocol

1. Bakterielle Musterbildung

1. Einen Tag vor dem Experiment wurde eine Population von Escherichia coli (Stamm MG1655 prpsM-GFP) gezüchtet. Beimpfen Sie die Kultur direkt aus dem gefrorenen Bestand und züchten Sie sie über Nacht 20 Stunden lang in Lysogenie-Bouillon (LB)-Medium in einem Shaker-Inkubator bei 37 °C. Fügen Sie 50 μg/ml Kanamycin hinzu, damit die Zellen das prpsM-GFP-Plasmid (grün fluoreszierendes Protein) zurückhalten.
2. Stellen Sie den Box-Inkubator (Abbildung 1A) am Tag des Experiments einige Stunden vor dem Versuch auf 37 °C ein, um vor dem Start eine gleichmäßige und stabile Temperatur zu gewährleisten. Stellen Sie d....

Results

Abbildung 1: Schematische Darstellung der Plattform für die sequentielle kapillaritätsgestützte Assemblierung in einem mikrofluidischen Kanal. (A) Box-Inkubator. Der Box-Inkubator hält eine gleichmäßige und konstante Temperatur (hier 30 °C) .......

Materials