Vorbereitung der Salmonella typhimurium-Kultur

Zusammenfassung

Quelle: Gutiérrez, S., et. al., Isolierung von Salmonella typhimurium-haltigen Phagosomen aus Makrophagen. J. Vis. Exp. (2017)

Dieses Video zeigt die Kultivierung und Aufbereitung von Salmonella typhimurium , um eine saubere, stoffwechselaktive Bakteriensuspension zu erhalten, die für den experimentellen Einsatz geeignet ist.

Protokoll

Alle Schritte, bei denen pathogene Salmonella typhimurium verwendet werden, müssen in einer Einrichtung der biologischen Sicherheitsstufe BSL-2 (Biosicherheitsstufe 2) oder höher durchgeführt werden.

1. Kultivierung von Salmonella typhimurium

1. Impfen Sie Salmonella typhimurium (Stamm SL1344) aus einer einzelnen Bakterienkolonie mit einer Bakterienschleife in 5 ml Brühe für die Hirn-Herz-Infusion (BHI).
2. Inkubieren Sie die Bakteriensuspension in einem Inkubator bei 37 °C über Nacht unter Schütteln.
3. Am folgenden Tag wird 1 ml der Bakteriensuspension in 19 ml BHI-Bouillon in einem Erlenmeyerkolben überführt und bei 37 °C in einem Inkubator unter Schütteln inkubiert.
4. Überwachen Sie das Wachstum von S. typhimurium , indem Sie die optische Dichte (OD) bei 600 nm (OD₆₀₀) mit einem Spektralphotometer messen. Die Messungen sollten ca. alle 30 Minuten durchgeführt werden.
5. Wenn OD₆₀₀ 1,0 erreicht, nehmen Sie die Bakteriensuspension aus dem Inkubator und geben Sie sie in ein 50-ml-Röhrchen. Bakterien bei 5.400 x g für 15 min bei 4 °C zentrifugieren.
6. Überstand entfernen und in 10 ml steriler phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) resuspendieren.
7. Zentrifugieren Sie bei 5.400 x g für 15 min bei 4 °C.
8. Entfernen Sie den Überstand und resuspendieren Sie die Bakterien in 4,9 ml sterilem PBS.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
MgCl₂	Carl Roth	Nr. A537.4
Saccharose	Carl Roth	4621.1
Mannit	Carl Roth	4175.1
SmartSpec 3000 Spektralphotometer	Bio-Rad	170-2501
Bakterienschleife (10μl)	Sarstedt	86.1562.010
Salmonella enterica serovar Typhimurium SL1344	Leibniz-Institut DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen
PBS (Phosphatgepufferte Kochsalzlösung)	Biochrom	Nr. L1825