Extraktion und Reinigung von Plastoglobuli aus photosynthetischen Bakterien

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Shivaiah, K., et al. Isolierung von Plastoglobuli-Lipidtröpfchen aus pflanzlichem Blattgewebe und Cyanobakterien. J. Vis. Exp. (2022)

Das Video zeigt die Isolierung von Plastoglobuli aus Cyanobakterien. Es beginnt mit einer Kultur von Cyanobakterien und geht durch den Zellaufschluss mit mechanischer Kraft. Die Freisetzung von photosynthetischen Pigmenten deutet auf eine erfolgreiche Lyse hin. Ein Saccharose-Stufengradient wird dann verwendet, um zelluläre Komponenten nach Dichte zu trennen, so dass Plastoglobuli mit geringer Dichte oben eine deutliche Bande bilden können. Diese Fraktion wird gesammelt und für die weitere Analyse konserviert.

Protokoll

1. Isolierung von rohen Plastoglobuli

Extraktion von rohen Plastoglobuli aus Cyanobakterien
1. Züchten Sie eine 50-ml-Kultur von Synechocystis sp. PCC 6803 in die stationäre Phase (ca. 7-10 Tage) und stellen Sie die Zelldichte mit einem Spektralphotometer auf eine optische Dichte bei 750 nm (OD₇₅₀) von 2,0 ein. Verwenden Sie für Kulturbedingungen BG-11-Medien und züchten Sie in einem Inkubator bei einer Lichtintensität von 150 μmol Photonen/m²/s, 2 % CO₂, 32 °C und kontinuierlichem Schütteln bei 150 Umdrehungen pro Minute (U/min).
2. Um die Polysaccharide zu entfernen, waschen Sie....

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Ergebnisse

Abbildung 1: Isolierung und Immunblotting von Plastoglobuli und Thylakoiden. (A) Eine repräsentative gereinigte Plastoglobuli-Probe von Z. mays vor der Extraktion aus dem Saccharosegradienten. (B) Ein.......