Gleitmotilität in Phormidium-Lacuna-Filamenten

Zusammenfassung

Quelle: Weber, N., et al., Natürliche Transformation, Proteinexpression und Kryokonservierung des filamentösen Cyanobakteriums Phormidium lacuna. J. Vis. Exp. (2022)

Dieses Video zeigt das Verfahren zur Beurteilung der Gleitmotilität in Phormidium-Lacuna durch Homogenisierung von Filamentkulturen zur Herstellung einer einheitlichen Suspension, Vorbereitung eines Petriplatten-Assay-Aufbaus über einem Objektträger und Visualisierung der Filamentbewegung.

Protokoll

1. Assay für Bewegung in flüssigem Medium
   1. Zur direkten Beobachtung der Motilität werden 8 ml Medium, das P. lacuna enthält, in eine 6 cm große Petrischale überführt. Warten Sie einige Minuten, bis die Probe Raumtemperatur erreicht hat, und decken Sie dann die Petrischale mit Zellophanfolie ab.
   2. Legen Sie einen Objektträger mit einer Kamera auf den x-y-Tisch eines Standardmikroskops. Schalten Sie das Mikroskoplicht ein. Im Idealfall verwenden Sie für die Beleuchtung immer die gleichen elektrischen und optischen Einstellungen. Bewegen Sie ein 4-faches oder 10-faches Objektiv in den Weg des Lichts.
   3. Stellen Sie die Petrischale auf die Folie. Passen Sie einzelne Filamente oder Filamentbündel durch x-, y- und z-Bewegungen des Tisches an.
      ANMERKUNG: Durch die dreidimensionale Anordnung kann nur ein Teil des relevanten Ausschnitts scharf gestellt werden. Durch die Cellophanfolie kann der Fokus ohne Einschränkung eingestellt werden.
   4. Beobachten Sie die Bewegungen einzelner Filamente oder Bündel. Stellen Sie sicher, dass die Objektivlinse die Flüssigkeit nicht berührt. Zeichnen Sie die Bewegungen von Filamenten mit einer Standard-Mikroskopkamera auf.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Glaswaren, verschiedene
Mikroskop DM750	Zeiss
Okularkamera MikrOkular Full HD	Bresser		für Zeitrafferaufnahmen, gekoppelt an Raspberry Pi Minicomputer
Petrischalen aus Polystyrol, 60 mm x 15 mm	Merck	P5481-500EA
Software, URL
BildJ		Software für die IMAGE-Verarbeitung (Pixelintensitäten, Kreisdurchmesser)
Nährmedien
Künstliches Meerwasser	0,41 M NaCl, 53 mM MgCl₂, 28 mM Na₂SO₄, 10 mM CaCl₂, 9 mM KCl, 2,4 mM NaHCO₃, 0,84 mM KBr, 0,49 mM H3BO₃, 90 μM SrCl₂, 72 μM NaF
f/2 -flüssiges Medium	künstliches Meerwasser, 0,1 %ige (v/v) Spurenelementlösung, 0,05 %ige (v/v) Vitaminlösung, 0,88 mM NaNO₃, 36 μM NaH₂PO₄
Spurenelement-Lösung	0,36 mM NaH₂PO₄, 12 μM Na₂EDTA, 39 nM CuSO₄, 26 nM Na₂MoO₄, 77 nM ZnSO₄, 42 nM CoCl₂, 0,91 μM MnCl₂
Vitaminlösung	0,3 μM Thiamin-HCl, 2,1 nM Biotin, 0,37 nM Cyanocobalamin