Vorbereitung einer anaeroben Schlammkultur unter sauerstofffreien Bedingungen

Zusammenfassung

Quelle: Wagner, A. O., et al., Medium Preparation for the Cultivation of Microorganisms under Strictly Anaerobic/Anoxic Conditions. J. Vis. Exp. (2019)

Dieses Video zeigt die Aufbereitung und Inokulation von anaeroben Kulturen mit sauerstofffreiem Schlamm unter streng kontrollierten, sauerstoffarmen Bedingungen.

Protokoll

Beimpfung des Mediums

1. Bereiten Sie das Inokulum aus dem anaeroben Fermenter vor.
   1. 400 ml destilliertes Wasser in einen Kolben geben und zum Kochen bringen.
   2. Kühlen Sie es ab (< 30 °C) und spülen Sie den Kopfraum dauerhaft mit N₂ durch.
   3. Etwa 100 g Schlamm aus einem anaeroben Faulbehälter zugeben.
      ANMERKUNG: Vermeiden Sie einen übermäßigen Kontakt von Schlamm mit Sauerstoff.
   4. Notieren Sie die genaue Masse des zugesetzten Schlamms für die genaue Bestimmung der Verdünnung.
   5. Tauschen Sie den Kopfraum des Kolbens gegen N₂ aus und verschließen Sie ihn mit einem Septum aus Butylkautschuk.
   6. Schütteln Sie den Kolben 30 Minuten lang bei 120 U/min.
2. Entnehmen Sie 5 ml Inokulum mit einer Spritze + Kanüle und injizieren Sie es in die vorbereiteten Serumflaschen.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Kulturflaschen (120 mL, N20)	Ochs, Deutschland	102046
Septen aus Butylkautschuk (N20)	Ochs, Deutschland	102049
Aluminium-Kappen (N20)	Ochs, Deutschland	102050
N₂ Gas	Messer, Österreich		Reinheit 5.0
Spritzen + Kanülen	verschieden
Crimpzange	Ochs, Deutschland	102051
De-Crimper	Ochs, Deutschland	102052
GC2010	Shimadzu