Histologische und hämatologische Analysen zur Bewertung der Auswirkungen von Bacillus subtilis bei hitzebelasteten Ratten

Zusammenfassung

Quelle: Sorokulova, I., et al. Verhinderung von Hitzestress-Nebenwirkungen bei Ratten durch den Bacillus-subtilis-Stamm. J. Vis. Exp. (2016)

Dieses Video präsentiert histologische und blutmikroskopische Analysen, die zur Bewertung der schützenden Wirkung von Bacillus subtilis bei Ratten mit Hitzestress eingesetzt werden.

Protokoll

1. Histologische Analyse

1. Dünndarmproben werden von jeder Versuchsratte chirurgisch entnommen. Proben werden in Bouins Fixativ fixiert, in Paraffin eingebettet, 6-μm-Schnitte vorbereitet und Schnitte mit Hämatoxylin und Eosin nach Standardverfahren gefärbt.
2. Verwenden Sie ein hochauflösendes Mikroskopsystem zur Messung der Höhe der Darmzilliden und der gesamten Schleimhautstärke in jeder Probe (Vergrößerung 100-fach). Analysieren Sie 4 Proben jeder Ratte und führen Sie mindestens zwanzig Messungen pro Probe vor. Express-Ergebnisse in Mikrometern.

2. Hochauflösende Lichtmikroskopie von Blut

1. Verwenden Sie eine Schwingungsisolationsplattform als Basis für das Mikroskopsystem sowie die Videokamera und den Computer, um die Live-Bilder aufzunehmen. Testbilder mit einem Richardson-Objektträger kalibrieren.
2. Setzen Sie 7 μl frisch entnommenes Blut jeder Ratte auf eine Glasfolie, einen Deckglied, fotografieren Sie es und nehmen Sie zehn Bildrahmen mit je 72 × 53,3 μm² pro Probe auf (Vergrößerung 1.700X).
3. Messen Sie die Konzentration von Vesikeln mit Software, die hochauflösende, direkt sichtbare optische Bilder in Echtzeit bereitstellt. Untersuchen Sie mindestens 20 Bildrahmen pro experimenteller Bedingung.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	P4417
Bouins Fixierung	Elektronenmikroskopiewissenschaften, Hatfield, PA, USA	15990
Richardson-Testrutsche	Elektronenmikroskopie-Wissenschaft, Hatfield, PA, USA	80303
Sony DXC-33 Videokamera	Sony
Lichtmikroskop-Optiksystem	CitoViva Technology Inc., Auburn, AL
Image-Pro Plus Software	Media Cybernetics, MD, USA