Motilitätstest zum Vergleich von Vibrio-Cholerae-Stämmen mit Triphenyltetrazoliumchlorid

In diesem Artikel

Zusammenfassung

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Quelle: Brumfield, K. D., et al. Labortechniken, die zur Aufrechterhaltung und Unterscheidung von Biotypen von Vibrio cholerae – klinische und Umweltisolate eingesetzt werden. J. Vis. Exp. (2017)

Dieses Video demonstriert einen Soft-Agar-Test mit Triphenyltetrazoliumchlorid, um die Beweglichkeit von Vibrio-cholerae-Stämmen zu bewerten und zu vergleichen, indem die Stoffwechselaktivität durch die Bildung der roten Zonen um aktiv wandernde Zellen visualisiert wird.

Protokoll

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Motilitätstest
1. Bereiten Sie über Nacht Kultur(en) von Vibrio-Cholerae-Sorten in flüssiger LB-Brühe (Luria-Bertani) zu.
2. Pellet 1,8 ml der Übernachtkultur für 2 Minuten durch Zentrifugation (≥8.600 x g) in einem sterilen 2-mL Mikrozentrifugenröhrchen und entfernen Sie den Überstandsstoff mit einer Pipette. Setzen Sie das Zellpellet durch Pipettieren in 1,8 mL 1x PBS (phosphatgepufferte Kochsalzlösung) wieder auf.
3. Wiederholen Sie das Waschverfahren dreimal, gefolgt von einer abschließenden Wiederaufsetzung in 1,8 mL 1x PBS.
4. Inokulieren Sie Motilitätsagarplatten, indem Sie eine Inokulationsstütze in die gewaschene Flüssigkeitskultur einsetzen und sie vertikal in das Medium einstechen. Zwischen jeder Impfung sterilisieren Sie den Drahtstich mit einem Bunsenbrenner und stellen Sie beim Stachen von Agar sicher, dass der Impfstich nicht verbiegt wird, da dies die Ergebnisse verändern kann.
5. Inkubieren Sie die Platten mit der Deckelseite nach oben für 14 bis 24 Stunden bei 37 °C. Nach 14 Stunden sollten die Motilitätsplatten genau überwacht werden, um ein Überwuchern von Kulturen zu verhindern.

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Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name

Unternehmen

Katalognummer

Kommentare

Agar

Becto, Dickinson und Co.

214030

http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=214030&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D214030%26typeOfSearch%3DproductSearch

Tischzentrifuge

Eppendorf

5424

Jede Zentrifuge für 1,5-ml-Eppendorf-Röhrchen

Le Stab

Decon Labs Inc.

MP186-5

http://deconlabs.com/products/lestab/

LB-Brühe (Miller)

Thermo/Gibco

10855021

Für statische Bakterienkultur und OD-Messung

Petrischalen (150 mm x 15 mm)

Fisher Scientific

FB0875714

https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-clear-lid-12/fb0875714?searchHijack=true&searchTerm=FB0875714&searchType=RAPID

PBS 1x

Für statische Bakterienkultur und OD-Messung

Triphenyltetrazoliumchlorid

Alfa Aesar

A10870

https://www.alfa.com/en/catalog/A10870/

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