Motilitätstest zum Vergleich von Vibrio-Cholerae-Stämmen mit Triphenyltetrazoliumchlorid

Zusammenfassung

Quelle: Brumfield, K. D., et al. Labortechniken, die zur Aufrechterhaltung und Unterscheidung von Biotypen von Vibrio cholerae – klinische und Umweltisolate eingesetzt werden. J. Vis. Exp. (2017)

Dieses Video demonstriert einen Soft-Agar-Test mit Triphenyltetrazoliumchlorid, um die Beweglichkeit von Vibrio-cholerae-Stämmen zu bewerten und zu vergleichen, indem die Stoffwechselaktivität durch die Bildung der roten Zonen um aktiv wandernde Zellen visualisiert wird.

Protokoll

1. Motilitätstest
   1. Bereiten Sie über Nacht Kultur(en) von Vibrio-Cholerae-Sorten in flüssiger LB-Brühe (Luria-Bertani) zu.
   2. Pellet 1,8 ml der Übernachtkultur für 2 Minuten durch Zentrifugation (≥8.600 x g) in einem sterilen 2-mL Mikrozentrifugenröhrchen und entfernen Sie den Überstandsstoff mit einer Pipette. Setzen Sie das Zellpellet durch Pipettieren in 1,8 mL 1x PBS (phosphatgepufferte Kochsalzlösung) wieder auf.
   3. Wiederholen Sie das Waschverfahren dreimal, gefolgt von einer abschließenden Wiederaufsetzung in 1,8 mL 1x PBS.
   4. Inokulieren Sie Motilitätsagarplatten, indem Sie eine Inokul....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Agar	Becto, Dickinson und Co.	214030	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=214030&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D214030%26typeOfSearch%3DproductSearch
Tischzentrifuge	Eppendorf	5424	Jede Zentrifuge für 1,5-ml-Eppendorf-Röhrchen
Le Stab	Decon Labs Inc.	MP186-5	http://deconlabs.com/products/lestab/
LB-Brühe (Miller)	Thermo/Gibco	10855021	Für statische Bakterienkultur und OD-Messung
Petrischalen (150 mm x 15 mm)	Fisher Scientific	FB0875714	https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-clear-lid-12/fb0875714?searchHijack=true&searchTerm=FB0875714&searchType=RAPID
PBS 1x			Für statische Bakterienkultur und OD-Messung
Triphenyltetrazoliumchlorid	Alfa Aesar	A10870	https://www.alfa.com/en/catalog/A10870/