Voges-Proskauer-Test zur Unterscheidung der Biotypen von Vibrio cholerae

Zusammenfassung

Quelle: Brumfield, K. D., et al., Labortechniken zur Erhaltung und Unterscheidung von Biotypen von klinischen und Umweltisolaten von Vibrio cholerae . J. Vis. Exp. (2017).

Dieses Video demonstriert den Voges-Proskauer-(VP)-Test, um zwischen drei Biotypen von Vibrio cholerae zu unterscheiden: klassisch, Wildtyp-El Tor und El Tor-Variante. Jede Kultur wird in ein glukosehaltiges Medium geimpft, inkubiert und mit α-Naphthol und Kaliumhydroxid behandelt, um das Vorhandensein von Acetoin nachzuweisen. Eine rosa-rote Farbe, die auf eine positive VP-Reaktion hinweist, wird nur im Wildtyp-El Tor-Biotyp beobachtet und unterscheidet ihn von den klassischen und varianten Typen.

Protokoll

Voges-Proskauer-(VP)-Verfahren

1. Bereite über Nacht Kultur(en) in flüssiger LB-Brühe vor.
2. Inokulieren Sie 4 ml methylrote Voges-Proskauer, oder MR-VP-Brühe, indem Sie 10 μL zuvor vorbereitete Übernachtkultur in 4 mL MR-VP-Brühe in einem sterilen Kulturröhrchen pipettieren und mit Belüftung in einem Shaker-Inkubator bei 225 U/min für 12 bis 16 Stunden bei 37 °C inkubieren.
3. Fügen Sie 150 μL 5 % (w/v) α-Naphthol und 50 μL 40 % (w/v) KOH zu 1 mL Aliquoten der MR-VP-Übernachtkultur in sterilen Kulturröhrchen hinzu.
4. Kurz vortexen lassen und bis zu 4 Stunden bei Zimmertemperatur stehen, bis sich die Farbe verändert.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
MR-VP Broth	Difco	216300	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=216300&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3Dmr-vp%2Bmedium%26typeOfSearch%3DproductSearch
KOH	Fisher Scientific	P250-500	https://www.fishersci.com/shop/products/potassium-hydroxide-pellets-certified-acs-fisher-chemical-5/p250500?searchHijack=true&searchTerm=P250500&searchType=RAPID
α-napthol	MP Biomedizin	204189	http://www.mpbio.com/product.php?pid=05204189