Beurteilung der bakteriellen Beweglichkeit mit einem mikrofluidischen Gerät

Abstract

Quelle: Scheidweiler, D., et al. Die Kombination von fluidischen Geräten mit Mikroskopie und Durchflusszytometrie zur Untersuchung des mikrobiellen Transports in porösen Medien über räumliche Skalen hinweg. J. Vis. Exp. (2020).

Dieses Video demonstriert den Einsatz eines mikrofluidischen Geräts zur Quantifizierung der bakteriellen Beweglichkeit durch eine poröse Matrix, die aus zufällig angeordneten Säulen besteht. Fluoreszierend markierte Bakterien werden in das Gerät eingeführt, mikroskopisch fotografiert, während sie durch die poröse Matrix in den Beobachtungskanal gelangen, und analysiert, um eine Durchbruchkurve (BTC) zu erzeugen.

Protocol

1. Bedingungen der Bakterienkultur

1. Unter einer laminaren Flusshaube verwenden Sie 100 μL eines Glycerollagers aus grünem fluoreszierendem Protein (GFP)-markierten Pseudomonas putida KT2440 (1 × 10^{7 mL-1}, gelagert bei -80 °C), um 5 mL Luria-Bertani (LB)-Medium zu inokulieren. Inkubieren Sie bei 30 °C und schütteln Sie über Nacht bei 250 U/min.
2. Am nächsten Tag wird 100 μL der Übernachtkultur in 5 mL LB-Medium wieder suspendiert und unter denselben Bedingungen 5 Stunden (exponentielle Phase) inkubiert. Probe ein 1 mL Aliquot in ein 2 mL Rohr, lasse es auf Raumtemperatur (~15 min) abkühlen und zentrifugiere (2300 x g für ....

Results

Abbildung 1: Fluidische Geräte zur Untersuchung des mikrobiellen Transports in porösen Medien (A) Abbildung eines aus Poly(Methylmethacrylat (PMMA) gemahlenen Fluidikgerät. Die poröse Matrix wird in die Grundschicht des Geräts gefräst und d.......

Materials