Quantifizierung des bakteriellen Ausscheidungs zur Bewertung des Infektionsübertragungspotenzials bei Drosophila

Zusammenfassung

Quelle: Siva-Jothy, J. A. et al., Orale bakterielle Infektion und Ausscheidung bei Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2018)

Dieses Video demonstriert das Verfahren zur Überwachung der bakteriellen Ausscheidung bei Drosophila, indem eine infizierte Fliege über mehrere nahrungshaltige Röhren übertragen, abgeschiedene Bakterien wiedergewonnen und lebensfähige Kolonien durch serielle Verdünnung und Panzerung quantifiziert werden.

Protokoll

1. Messung des bakteriellen Ausscheidens
   1. Missen Sie den Haarausfall zusammen mit der inneren Last.
   2. Nach der Infektion werden einzelne Fliegen in 1,5-mL-Mikrozentrifugenröhren mit ~50 μL Lewis-Medium für 24 Stunden übertragen.
   3. Entfernen Sie die Fliegen für die interne Ladungsmessung und waschen Sie die Schläuche mit 100 μL 1x PBS (phosphatgepufferter Kochsalzlösung), indem Sie 3 Sekunden lang stark vortexieren.
   4. Messen Sie die CFUs (koloniebildende Einheiten) in dieser Wäsche, indem Sie auf LB (Luria-Bertani) Nährstoffagar plattieren.
   5. Nach der Infektion werden einzelne Fliegen in 1,5-mL-Mikrozentrifugenröhren mit ~50 μL Lewis-Medium für 24 Stunden übertragen.
   6. Die Fliegen werden für weitere 24 Stunden in neue Mikrozentrifugenröhren mit ~50 μL Lewis-Medium übertragen. Waschen Sie die kontaminierten Röhrchen mit 100 μL 1x PBS, indem Sie 3 Sekunden lang stark vortexieren.
   7. Messen Sie die CFUs in dieser Wäsche, indem Sie sie auf LB-Nährstoffagar anrichten.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Phiolen	Sarstedt Ltd.	58.49	Polystyrol-Flachbasisrohr 75 mm x 23,5 mm, 23 ml
Agar	Sigma-Aldrich	A7002	Agar, Asche 2,0–4,5 %
Brauner Zucker	Bidvest	66032	Hellbrauner, weicher Zucker
Mais	Taubenfarm		Bio-Maismehl
Fermipanhefe	Bidvest	96360	Trockene, sofortige Hefe
Petrischalen	Fisher Scientific UK Ltd.	15788517	X600 Petrischale 90 x 16,2 mm steriler Dreifachventil
Eppendorf-Tube (1,5 ml)	Sarstedt Ltd.	72.690.001	Sarstedt Mikroröhren-Konus-Sockel-Schubkappe 1,5 ml Standardneutralleiter
Ethanol	VWR International Ltd.	20821.33	ETHANOL ABSOLUTE ANALAR NP ACS/R.PE - Analytische Qualität
LB-Brühe, Miller	Fisher Scientific UK Ltd.	BP1426	Enthält 10g Trypton, 5g Hefeextrakt, 10g Natriumchlorid pro Liter
96-Bohrloch-Mikroplatten	Scientific Laboratory Supplies Ltd.	353072	Falcon 96 Gut klare, flachbodenige, TC-behandelte Polystyrolzellkultur-Mikroplatte mit sterilem Deckel
Vortex	Fisherbrand		Whirlimixer 75W 50-6-Hz 220-240V
10 μL Pipettenspitzen	Greiner Bio-one Inc	741015	Ganz schön im Gilson-Stil. Graduiert, entleert, Nachfüllung, 960 Teile
200 μL Pipettenspitzen	Greiner Bio-one Inc	741065	Ganz schön im Gilson-Stil. Graduiert, entleert, Nachfüllung, 960 Teile
1000 μL Pipettenspitzen	Greiner Bio-one Inc	741045	Ganz schön im Gilson-Stil. Graduiert, entleert, Nachfüllung, 960 Teile
20 μL gefilterte Pipettenspitzen	Greiner Bio-one Inc	774288	Filterspitze im Gilson-Stil. Durchsichtig, blaues Rack, Einzelpackung, R/Dnase-frei, 10 Racks mit 96 Stück
200 μL gefilterte Pipettenspitzen	Greiner Bio-one Inc	739288	Filterspitze im Gilson-Stil. Durchsichtig, blaues Rack, Einzelpackung, R/Dnase-frei, 10 Racks mit 96 Stück
1000 μL gefilterte Pipettenspitzen	Greiner Bio-one Inc	740288	Filterspitze im Gilson-Stil. Clear, Rack Blue, Single Packed, R/Dnase frei, 10 Racks mit 60 Stück