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Alle Verfahren, die Tiermodelle betreffen, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem JoVE veterinärmedizinischen Überprüfungsausschuss überprüft.
1. Impfung mit Pseudomonas aeruginosa
- Verdünnen Sie die PAO1:lux-Kultur über Nacht auf OD600 = 0,05 in 75 ml Lysogeny-Brühe (LB)-Medien, das 100 μg/mL Carbenicillin enthält, und lassen Sie die Bakterien wachsen, bis die Kultur sich in einer frühen exponentiellen Phase befindet (OD600≈0,3). Dies sollte etwa 2–3 Stunden dauern.
- Verdünnen Sie PAO1:lux in phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) auf eine Konzentration von (7,5 ± 2,5) x 102 CFU/mL. Stellen Sie sicher, dass Sie überschüssiges Inokulum vorbereiten, um genügend Volumen zu gewährleisten und nach dem Experiment eine Anplatte zu ermöglichen. Beim Transport zwischen Einrichtungen verwenden Sie eine doppelte Eindämmung in einer auslaufdichten Box, die deutlich mit Biohazard gekennzeichnet ist.
- Führen Sie alle Arbeiten mit P. aeruginosa und Mäusen unter Verwendung von zugelassener persönlicher Schutzausrüstung in einem von der Tierbiosicherheit Level 2 (ABSL-2) zugelassenen biologischen Sicherheitsschrank (BSC) durch. Wiederverwendbare Geräte wie die Waage sollten mit Frischhaltefolie abgedeckt werden, um Verunreinigungen zu verhindern.
- Betäuben Sie die Maus mit 3 % Isofluran. Wige die Maus und notiere das Gewicht. Injizieren Sie die Maus subkutan mit vorgewärmtem, sterilem 0,9 % Natriumchlorid, 250 μL an jeder Flanke, insgesamt 500 μL.
- Wenn der transparente Folienverband der Maus über Nacht abgelöst wurde, entfernen Sie vorsichtig eventuelle Krusten und legen Sie einen neuen Verband auf.
- Verwenden Sie eine 500 μL Tuberkulin-27-G-Sicherheitskappenspritze, um 40 μL der PAO1:lux-Suspension durch den transparenten Filmverband in jede Wunde einzubringen. Für nicht-impfende/PBS-Wundkontrollen sollten verschiedene Mäuse verwendet werden, um eine Kreuzkontamination von der kontralateralen Seite zu verhindern.
- Setze die Maus zurück in ihren Käfig auf ein Heizkissen und Monitor, bis sie aufwacht. Alle Mäuse sollten einzeln in separaten Käfigen untergebracht werden, um Kreuzkontamination zu verhindern.
- Geben Sie kalorienreiche Nahrungsergänzungspaste zwischen den Futterpellets auf dem Boden des Käfigs.