Biolumineszenzbildgebung bakterieller Infektionen bei Mäusen

Zusammenfassung

Quelle: de Vries, C. R., et al., Ein verzögertes Impfungsmodell der chronischen Wundinfektion von Pseudomonas aeruginosa . J. Vis. Exp. (2020).

Dieses Video demonstriert eine biolumineszente Bildgebungstechnik zur Überwachung des Verlaufs bakterieller Infektionen in einem lebenden Mausmodell. Pathogene Bakterien, die mit dem luxABCDE-Reportersystem konstruiert wurden, senden Licht an der Infektionsstelle aus, was die Visualisierung metabolisch aktiver Bakterien ermöglicht. Durch die Abbildung der Maus über die Zeit können Forscher die Infektionsdynamik nicht-invasiv verfolgen und die biolumineszente Signalintensität quantifizieren.

Protokoll

1. Herstellung und Wachstum von Bakterien

1. Führen Sie alle Arbeiten mit P. aeruginosa und Tieren mit BSL-2-Vorsichtsmaßnahmen gemäß dem institutionellen Biosicherheitsausschuss des Forschers und den Richtlinien des Tiernutzungsausschusses durch. Alle hier beschriebenen Schritte mit P. aeruginosa, einschließlich Mausimpfung, in einem Biosicherheitsschrank ausführen.
2. Der leuchtende PAO1:lux-Stamm von P. aeruginosa ist auf Anfrage in unserem Labor erhältlich. Streak PAO1, als gefrorenes Glycerolfond gelagert, auf Lysogeny Broth (LB) Agar. Für den lumineszenten PAO1:lux-Stamm sollte LB-Agar selektive Antibiotika enthalten (100 μg/mL Carb....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
0,9 % Natriumchlorid-Injektion	Hospira	2484457
18 G x 1 sterile Nadel	BD	305195
25 G x 1 1/5 sterile Nadel	BD	305127
Alkoholabstrich	BD	326895
Aura Imaging Software	Bildgebung von spektralen Instrumenten	n/a
Betadine	Purdue Frederick Company	19-065534
Buprenorphin SR LAB	Zoopharm	n/a
C57BL/6J männliche Mäuse	Das Jackson-Labor	664
Einwegbiopsie-Punch, 6 mm	Integra	33-36
Feine Schere – Wolframkarbid	Feine wissenschaftliche Werkzeuge	14568-09
Glasperlen-Trockensterilisator	Harvard-Apparat	61-0183
Granulierter Agar	Fisher-BioReagenzien	BP9744
Heizpolster	Milliard	804879481218
Insulinspritze mit 28-G-Nadel	BD	329461
Lago X Bildgebungssystem	Bildgebung von spektralen Instrumenten	n/a
LB-Brühe	Fisher-BioReagenzien	BP1426
Leur-Lok 1 mL Spritze	BD	309628
Mini Arco Tiertrimmer	Wahl Professional	919152
Nair Haarentfernungslotion mit Babyöl	Kirche und Dwight	n/a	Erhältlich in jeder Apotheke
Oktagon-Zange	Feine wissenschaftliche Werkzeuge	11041-08
Petrischale	Falke	351029
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) 1x	Corning	21-040-CV
Press- und Versiegelungsfolie	Gut	n/a
SafetyGlide Insulinspritze mit 30-G-Nadel	BD	305934
Safetyglide Insulinspritze, 1/2 mL, 30 G x 5/16 TW	BD	305934
Maßstab	Ohaus Scout Pro	SP202
Supplementales Nahrungsergänzungsmittel	Henry Schein Tiergesundheit	29908
Tegaderm, 6 cm x 7 cm	3M	1624W