<ol><li>Seziere den Mückenmittelarm<ol style='list-style-type:decimal;'><li>Übertragen Sie die oberflächensterilisierte Mücke mit einem Tropfen sterilen 1x phosphatgepufferten Kochsalzpuffers (PBS) auf den Glasträger. Sezieren Sie unter dem Seziermikroskop.</li><li>Bei der niedrigeren Vergrößerung des Seziermikroskops werden die Beine, Flügel und der Kopf der Mücke vorsichtig entfernt, um eine Flucht zu verhindern. Entfernen Sie die letzte Somit der Mücke, indem Sie direkt schneiden, anstatt sie zu ziehen, um eine Zerstörung des Verdauungstrakts zu verhindern.</li><li>Klemmen Sie den Thorax der Mücke und das Ende des Bauches mit einer Pinzette zusammen. Ziehe vorsichtig den Verdauungstrakt der Mücke heraus. Der erworbene Verdauungstrakt enthält üblicherweise die Frucht, den Vordarm, den Mitteldarm, den Hinterdarm und die Malpigh-Röhren.</li><li>Stellen Sie das Seziermikroskop auf eine höhere Vergrößerung ein. Entfernen Sie die Frucht-, Vorderdarm-, Hinterdarm- und Malpighian-Röhrchen aus dem dissektionierten Verdauungstrakt, um den Mitteldarm der Mücke zu erhalten.</li><li>Seien Sie vorsichtig beim Entfernen der Pflanze, da die Pflanze nach der Aufnahme einer Zuckermahlzeit aufbläht und dem Mitteldarm ähnelt. Die Malpighian-Röhren, eine Gruppe langer und dünner Ausscheidungsröhren, befinden sich an der Grenze zwischen Mitteldarm und Hinterdarm.</li></ol></li><li>Isolation von Darmbakterien<ol style='list-style-type:decimal;'><li>Übertragen Sie den dissektionierten Mitteldarm in ein steriles 1,5-ml-Rohr mit 200 μL sterilem 1x-PBS-Puffer.</li><li>Mahlen Sie den Mitteldarm auf einer sterilen Bank gründlich mit einem sterilen Stößel, um eine vollständige Freisetzung der Darmbakterien in den Puffer zu ermöglichen.</li><li>Serielle Verdünnung des Homogenats zu drei 10-fachen Verdünnungen. Gib 50 μL jeder Verdünnung auf die LB (Luria-Brühe) Agarplatte und verteile sie auf der Platte. Wenn der Mitteldarm eine hohe Konzentration an Darmflora aufweist, ist es wichtig, weitere serielle Verdünnungen vorzunehmen, um einzelne Kolonien herauszufiltern.</li><li>Inkubieren Sie die Platte bei 37 °C für 1–2 Tage, bis einzelne Kolonien sichtbar sind.</li></ol></li></ol>

<table class='ck-table-resized'><tbody><tr><td>Aedes aegypti</td><td> </td><td> </td><td>Weibliche Mücken</td></tr><tr><td>Zentrifugenröhre</td><td>Sangon Biotech</td><td>F601620-0010</td><td>1,5 ml, natürlich, abgestuft, steril</td></tr><tr><td>Einweg-Tissue-Mahlmittel-Stößel</td><td>Sangon Biotech</td><td>F619072-0001</td><td>70 mm lang, konisch, blau, steril</td></tr><tr><td>Pinzette</td><td>Heckantrieb</td><td>F11029</td><td>Dissektion</td></tr><tr><td>LB-Agarpulver</td><td>Sangon Biotech</td><td>A507003</td><td>Trypton 10,0 g, Hefeextrakt 5,0 g, NaCl 10,0 g, Agar 15,0 g.</td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Zeiss</td><td>Stemi508</td><td> </td></tr><tr><td>10-facher PBS-Puffer</td><td>Sangon Biotech</td><td>E607016</td><td>Dieses Produkt ist eine 10-fache Lösung. Bitte verdünnen Sie es vor der Anwendung 10 Mal. Der pH-Wert liegt bei 7,4.</td></tr></tbody></table>

isolierung von bakterien aus dem mücken-mitteldarm

Quelle: <a href='https://app.jove.com/v/61341/a-bacterial-oral-feeding-assay-with-antibiotic-treated-mosquitoes'>Liu, X. et al. Ein bakterielles orales Fütterungsverfahren mit antibiotikabehandelten Mücken. J. Vis. Exp. (2020)</a>Dieses Video zeigt die Zerlegung des Mückenmitteldarms zur Isolierung von Darmbakterien. Der Mitteldarm wird aus dem Verdauungstrakt extrahiert, homogenisiert, um die Bakterien freizusetzen, und auf Nährstoffagar versetzt, um Bakterienkolonien zu kultivieren.

Isolierung von Bakterien aus dem Mücken-Mitteldarm

Source: Liu, X., et al. A Bacterial Oral Feeding Assay with Antibiotic-Treated Mosquitoes. J. Vis. Exp. (2020)This video demonstrates the dissection of ...

Beginnen Sie mit einem Objektträger, der eine betäubte erwachsene Mücke in einem Tropfen phosphatgepufferter Kochsalzlösung oder PBS enthält.Entfernen Sie unter einem Seziermikroskop die Beine, Flügel und den Kopf der Mücke.Schneiden Sie die Spitze des Bauches ab, um keine Schädigung des Verdauungstrakts zu vermeiden.Sichern Sie den Thorax und das Bauchende und ziehen Sie dann vorsichtig den Verdauungstrakt heraus, um ihn zu entfernen.Der extrahierte Verdauungstrakt umfasst den Mitteldarm, der für die Verdauung verantwortlich ist und verschiedene Darmbakterien beherbergt, die die Mückenphysiologie beeinflussen.Bei höherer Vergrößerung werden die umliegenden Strukturen vorsichtig entfernt, um den Mitteldarm zu isolieren.Übertragen Sie den isolierten Mitteldarm in eine frische Röhre mit PBS.Homogenisiere den Mitteldarm, um die Bakterien in das PBS freizusetzen.Verteile das verdünnte Homogenat auf einer Nähragarplatte.Inkubieren Sie die Platte, damit bakterielle Kolonien wachsen können, was die mikrobielle Flora des Mücken-Mitteldarms darstellt.Sezieren Sie die Mücke separat auf einem sterilen Glasträger mit einem Tropfen PBS. Entfernen Sie vorsichtig die Beine, Flügel und den Kopf der Mücke mit einer Pinzette.Klemmen Sie die Brust der Mücke und den letzten Bauchbereich mit einer Pinzette zusammen und trennen Sie den Verdauungstrakt, um den Verdauungstrakt zu isolieren.Verwenden Sie eine Pinzette, um die Ernte und den Malpighian-Schlauch aus dem Verdauungstrakt zu entfernen. Die Pflanze befindet sich vorne im Mitteldarm und wölbt sich nach der Aufnahme von Zuckerwasser. Malpighische Röhren sind eine Gruppe schlanker Ausscheidungsröhren an der Verbindung von Mitteldarm und Hinterdarm.Geben Sie den dissektionierten Mitteldarm in ein EP-Rohr mit 200 Mikrolitern sterilem PBS-Puffer und mahlen Sie es mit dem sterilen Mahlmittelstoßer auf der supersauberen Werkbank. Serielle Verdünnung des Homogenats auf drei 10-fache Verdünnungen bei jeweils 50 Mikrolitern auf die LB-Agarplatte und anschließend die Streuplatte.Inkubieren Sie die Platte bei 37 Grad für ein bis zwei Tage, bis einzelne Kolonien sichtbar sind.

isolation-of-bacteria-from-the-mosquito-midgut

Research

JoVE Encyclopedia of Experiments

Microbiology

Bacterial Pathogenesis and Host Interactions

bacterial-pathogenesis-and-host-interactions

Microbiome–Host Interactions

Isolation of Bacteria from the Mosquito Midgut

325 Aufrufe. Beginnen Sie mit einem Objektträger, der eine betäubte erwachsene Mücke in einem Tropfen phosphatgepufferter Kochsalzlösung oder PBS enthält.Entfernen Sie unter einem Seziermikroskop die Beine, Flügel und den Kopf der Mücke.Schneiden Sie die Spitze des Bauches ab, um keine Schädigung des Verdauungstrakts zu vermeiden.Sichern Sie den Thorax und das Bauchende und ziehen Sie dann vorsichtig den Verdauungstrakt heraus, um ihn zu entfernen.Der extrahierte Verdau...

Isolierung von Bakterien aus dem Mücken-Mitteldarm

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Name	Company	Catalog Number	Comments
Aedes aegypti			Weibliche Mücken
Zentrifugenröhre	Sangon Biotech	F601620-0010	1,5 ml, natürlich, abgestuft, steril
Einweg-Tissue-Mahlmittel-Stößel	Sangon Biotech	F619072-0001	70 mm lang, konisch, blau, steril
Pinzette	Heckantrieb	F11029	Dissektion
LB-Agarpulver	Sangon Biotech	A507003	Trypton 10,0 g, Hefeextrakt 5,0 g, NaCl 10,0 g, Agar 15,0 g.
Mikroskop	Zeiss	Stemi508
10-facher PBS-Puffer	Sangon Biotech	E607016	Dieses Produkt ist eine 10-fache Lösung. Bitte verdünnen Sie es vor der Anwendung 10 Mal. Der pH-Wert liegt bei 7,4.