Modellierung von Infektionen bei neonatalen Mäusen mit gekapselten biolumineszenten Bakterien

Zusammenfassung

Quelle: Seman, B. G. et al. Ein neonatales Bildgebungsmodell der gramnegativen bakteriellen Sepsis. J. Vis. Exp. (2020)

Das Video demonstriert ein neonatales Mausmodell zur Untersuchung systemischer Infektionen mit gekapselten biolumineszenten Bakterien. Neugeborene Welpen werden mit hoch- oder niedrigdosierten bakteriellen Suspensionen injiziert und zur Nachsorge zu ihrer Mutter zurückgegeben. Die gekapselten Bakterien entgehen der frühen Immundetektion, breiten sich systemisch aus und werden zeitlich mittels Lumineszenzbildgebung visualisiert. Dieses Modell ermöglicht eine nicht-invasive Verfolgung des Infektionsverlaufs bei Neugeborenenmäusen.

Protokoll

Alle Verfahren, die Tiermodelle betreffen, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem JoVE veterinärmedizinischen Überprüfungsausschuss überprüft.

1. Herstellung des bakteriellen Inokulums

1. Streaken Sie eine tryptische Soja-Agar-Platte (TSA) mit einer Inokulationsschleife zur Isolierung einer einzelnen Kolonie aus einem Gefrierbestand von Escherichia coli O1:K1:H7-lux , der stabil Luciferase ausdrückt und Kanamycin-Resistenz besitzt. Über Nacht bei 37 °C inkubieren.
2. Am folgenden Tag lassen Sie die Luria-Brühe (LB) in einem Biosicherheitsschrank auf Zimmertemperatur (25 °C) erreichen.
3. Unter einer Biosiche....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
1 mL Insulinspritze	Coviden	1188128012	Inokulum- oder PBS-Injektion
Tier-Tattoo-Tintenpaste	Ketchum	KI1482039	Tierbestimmung
Animal Tattoo Ink Green Paste	Ketchum	KI1471039	Tierbestimmung
Escherichia coli O1:K1:H7	ATCC	11775
Escherichia coli O1:K1:H7-lux (drückt Luciferase aus)	N/A	N/A	Intern bei WVU gebaut
DPBS, 1X	Corning	21-031-CV
Difco Tryptic Soy Agar	Becton, Dickinson und Co.	236950	Bakterienwachstum
IVIS Spektrum CT und Living Image 4.5 Software	Perkin Elmer	N/A	Intravitale Bildgebung
LB Broth, Lennox	Fisher-BioReagenzien	BP1427-500	Bakterienwachstum