Vorbereitung einer hämolytischen Staphylococcus aureus-Kultur für Studien zur Wirts-Pathogen-Interaktion

Zusammenfassung

Quelle: Behera, R.K. et al., Eine fluoreszenzbasierte Methode zur Untersuchung der bakteriellen Genregulation in infizierten Geweben. J. Vis. Exp. (2019)

Dieses Video demonstriert die Herstellung hämolytischer Staphylococcus aureus-Kulturen , um das Bakterienwachstum zu standardisieren und die metabolische Synchronisation für Wirt-Pathogen-Interaktionsstudien zu erreichen.

Protokoll

1. Herstellung eines bakteriellen Inokulums
   1. Streak Staphylococcus aureus-Stämme , die für die Isolierung auf Blutagarplatten aus einem gefrorenen Glycerolbestand interessant sind. Inkubieren Sie bei 37 °C für 16–24 Stunden, um hämolytische Phänotypen zu bestätigen, basierend auf ihrer Fähigkeit, rote Blutkörperchen (RBC) zu lysieren und klare transparente Zonen zu bilden.
   2. Beginnen Sie Übernachtkulturen, indem Sie einzelne Kolonien jeder Sorte mit 4 ml tryptischer Sojabrühe (TSB) in sterilen Glasröhrchen inokulieren. Drehen Sie die Röhren bei 37 °C für 16–24 Stunden in einer Röhrenwalze, die etwa 70° Winkel und 70 Umdrehungen pro Minute (RPM) eingestellt ist.
   3. Verwenden Sie ein Spektrophotometer, um die optische Dichte bei 600 nm (OD₆₀₀) der Kulturen aus Schritt 2.1.2 zu messen. Verwenden Sie steriles Medium als optische Referenz (Blank). Verdünnen Sie diese Zellen auf einen OD₆₀₀ von 0,05 in 25 ml steriler tryptischer Sojabrühe (TSB) in separaten 125 mL DeLong-Kolben (5:1 Kolben-Volumen-Verhältnis) und inkubieren Sie Kulturen in einem Wasserbad (für einen ordnungsgemäßen Wärmetransfer zu den Kulturen), schütteln Sie bei 280 U/min und stellen Sie sie auf 37 °C ein.
      HINWEIS: Das Wachstum des Inokulums kann auf verschiedene Weise erfolgen; Eine Methode zum Wachstum von Zellen in die exponentielle Phase wird vorgestellt. Unabhängig davon ist es wichtig, konsequent dieselbe Methode zur Vorbereitung der Zellen auf die Impfung anzuwenden.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
5% Schafblut	Hardy Diagnostics (Santa Maria, CA)	A10
Orbitales Schüttelwasserbad	New Brunswick Innova	NA
Tryptische Sojabrühe	VWR	90000-376
UV-sichtbares Spektrophotometer	Beckman Coulter-DU350	NA