Isolierung und Kultivierung von Bakterien aus Zebrafisch-Embryonen zur Einschätzung der Infektionslast

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Bernut, A., et al., Entschlüsselung und Bildgebung der Pathogenese und Cording von Mycobacterium abscessus in Zebrafisch-Embryonen. J. Vis. Exp. (2015).

Dieses Video demonstriert ein Protokoll zur Isolierung und Quantifizierung des Mycobacterium abszescessus aus einem infizierten Zebrafischembryo. Das Verfahren umfasst Embryonen-Euthanasie, Gewebelyse und Homogenisierung zur Freisetzung der Bakterien, gefolgt von Zentrifugation und Resuspension in einem Tensidpuffer. Abschließend wird die bakterielle Suspension seriell verdünnt, auf antibiotika-supplementiertem Agar aufgetragen und inkubiert, um die Bildung und Quantifizierung der Kolonie zu ermöglichen.

Protokoll

Vorbereitung und Lagerung des M. abscessus Inoculum
1. Wachstumsbedingungen von M. abscessus
  1. Schichten Sie M. abscessus aus einem -80°C Glycerolstock auf einen Middlebrook 7H10-Agar mit 10 % OADC und 0,5 % Glycerol (7H10OADc) und ergänzen Sie das passende Antibiotikum je nach Resistenzmarker, der vom Vektor für das fluoreszierende Protein codiert. Inkubieren Sie die Platten bei 30 °C für 4-5 Tage.
  2. Nehmen Sie eine fluoreszenz-positive Mykobakterienkolonie auf und inokulieren Sie 1 ml Middlebrook 7H9-Brühe mit OADC, 0,2 % Glycerol,....

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Ergebnisse

Abbildung 1. Präparation von dispersierten M. abscessus inocula. Ziehl-Neelsen-Färbung von R- oder S-Varianten, die auf Brühemedium vor jeder Behandlung (obere Paneele) oder nach der Behandlung (untere Paneele) a.......