Live-Bildgebung von Wirts-Pathogen-Interaktionen in Zebrafisch-Embryonen, die mit Mycobacterium abscessus infiziert sind,

Zusammenfassung

Quelle: Bernut, A. et al. Entschlüsselung und Bildabbildung der Pathogenese sowie der Sicherung von Mycobacterium abscessus in Zebrafischembryonen. J. Vis. Exp. (2015)

Dieses Video demonstriert ein Protokoll, das transgene Zebrafischembryonen verwendet, die fluoreszierende Makrophagen exprimieren und mit fluoreszierendem Mycobacterium abscessus rough strain infiziert sind, um Wirts-Pathogen-Interaktionen zu visualisieren. Es zeigt, wie extrazelluläre Korde die Immunausweichung ermöglichen, wodurch bakterielle Überlebensbedingungen und Schäden an Wirtszellen gefördert werden.

Protokoll

1. Live-Imaging der M. abscessus-Infektion

1. Tricain-anästhesierte Embryonen bei 1 % niedrigem Schmelzpunkt Agarose in einer 35 mm Petrischale vor Epifluoreszenzmikroskopie-Beobachtungen montieren. Verwenden Sie eine Glasbodenschüssel für die invergete konfokale Mikroskopie oder eine einzelne Karies-Depression für die aufrechte konfokale Mikroskopie. Orientieren Sie den Embryo an die gewünschte Position und bedecken Sie die erstarrte Agarose mit Fischwasser mit Tricain.
2. Verwenden Sie ein Epifluoreszenzmikroskop mit einem 10-fachen Objektiv für sequentielle Fluoreszenzaufnahmen und Übertragungsbilder des gesamten Embryos. Alternativ kann man ein konfokales Mikroskop mit 40- oder 63X-Zielen verwenden, um die Aktivität von Immunzellen nach einer Infektion zu visualisieren.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Agarose mit niedrigem Schmelzen	Sigma-Aldrich
Ethyl-3-Aminobenzoat-Methanesulfonatsalz (Tricain)	Sigma-Aldrich	A5040