Durchführung von Dünnschichtchromatographie zur Beurteilung des bakteriellen Exopolysaccharidabbaus

Zusammenfassung

Quelle: Hu, Y. et al. Analyse der Wechselwirkungen zwischen Endobiotika und menschlicher Darmmikrobiota mittels In-vitro-Badefermentationssystemen. J. Vis. Exp. (2019)

Dieses Video demonstriert den Einsatz der Dünnschichtchromatographie (TLC) zur Bewertung des Abbaus von Exopolysacchariden (EPS) durch die menschliche Kokalmikrobiota. EPS-Fragmente in Fermentationssupernatanten werden anhand von Größe und Polarität mittels TLC getrennt und dann nach kohlenhydratspezifischer Färbung als farbige Bänder visualisiert.

Protokoll

1. Exopolysaccharidabbau (EPS) durch die menschliche Fäkalmikrobiota

1. Geben Sie 0,2 μL fermentierte Supernatanten auf vorbeschichtete Silikagel-60 Dünnschichtchromatographie (TLC) Aluminiumplatten und trocknen Sie anschließend mit einem Föhn.
2. Entwickle die Platten in 20 ml einer Ameisensäure/n-Butanol/Wasser-Lösung (6:4:1, v:v:v) und trockne sie mit einem Föhn.
3. Die Platten in Orcinol-Reagenz zum Färben einweichen und dann mit einem Föhn trocknen.
   1. Stellen Sie Orcinolreagenzien her, indem Sie 900 mg Lichenol in 25 ml destilliertem Wasser auflösen und anschließend 375 ml Ethanol hinzufügen. Daher sollte konzentrierte Schwefelsäure langsam hinzugefügt und die Lösung gründlich vermischt werden.
4. Heizplatten bei 120 °C für 3 Minuten im Backofen und bewerten Sie den Abbau von EPS durch Messung der TLC-Bänder.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Backofen	Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd	DHG-9240A	Zum Erhitzen und Backen verwendet
Ethanol	Sigma-Aldrich	E7023	Verwendung zur Herstellung von Vitamin K1
Ameisensäure	Sigma-Aldrich	399388	Verwendet für TLC
Lichenol	Solarbio	C8380	Verwendung zur Herstellung der Farbplatte
n-Butanol	ChemSpider	71-36-3	Verwendet für TLC
Orcinol	Sigma-Aldrich	447420	Zur Herstellung von Orcinol-Reagenzien verwendet
Schwefelsäure	Sigma-Aldrich	150692	Zur Herstellung von Orcinol-Reagenzien verwendet
TLC-Aluminiumblech	MerckMillipore	116835	Verwendet für TLC