Quantifizierung der bakteriellen Gewebebelastung in einem Mausmodell chronischer Darminfektion

Abstract

Quelle: Lo, B. C., et al. Chronische Salmonellen-Infektion induzierte Darmfibrose. J. Vis. Exp. (2019)

Das Video demonstriert die Quantifizierung der Bakterienlast in einem Mausmodell einer chronischen Infektion mit streptomycinresistenter Salmonella-Typhimurium. Nach Euthanasie und steriler Dissektion werden Müses- und Milzgewebe entnommen, mit Stahlperlen homogenisiert, um Bakterien freizusetzen, und seriell verdünnt. Verdünnungen werden auf selektivem Agar verdünnt, und sichtbare Kolonien werden gezählt, um die Bakterienlast pro Gramm Gewebe in Darm- und systemischen Stellen zu schätzen.

Protocol

Alle Verfahren, die Tiermodelle betreffen, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem JoVE veterinärmedizinischen Überprüfungsausschuss überprüft.

1. Zubereitung von Salmonella Typhimurium ΔAroA-Kulturen zur oralen Meis-Gabe

1. Aus einem gefrorenen Glycerolbestand von S. typhimurium ΔAroA wird eine Streifplatte mit Luria-Bertani-Agar (LB agar) mit 100 μg/mL Streptomycin und einer sterilen Impfschleife hergestellt. Über Nacht bei 37 °C inkubieren. Streakplatten können bis zu einer Woche bei 4 °C gelagert werden.
2. Einen Tag vor der Infektion bereiten Sie das Antibiotikum vor, indem S....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
2 ml Rundboden-Safe-Schläuche	Eppendorf	22363344
Edelstahlperlen	Qiagen	69989
PBS	Gibco	10010031
Pipettespitzen mit großer Öffnung	Fisher	2707134
2-mL Megablockplatten	Sarstedt	82.1972.002
Gavage-Nadeln	FST	18061-22
Streptomycinsulfat	Sigma	S9137
Mischmühle	Retsch	MM