Herstellung einer Bakterienkultur im Boden für eine Bakteriophageinfektion

Zusammenfassung

Quelle: Cross, T. et al., Eine optimierte Anreicherungstechnik zur Isolierung von Arthrobacter-Bakteriophagearten aus Bodenprobenisolaten. J. Vis. Exp.(2015)

Dieses Video demonstriert die Herstellung einer Bakterienkultur zur Herstellung von Bakteriophagen. Es behandelt die Schritte des Impfens eines Bodenbakteriums in eine belüftete Flasche, fördert ein gleichmäßiges Wachstum durch Belüftung und Schütteln sowie überwacht die Zelldichte mittels optischer Dichtemessungen. Sobald die Kultur die optimale Wachstumsphase erreicht hat, ist sie bereit für eine effiziente Bakteriophageproduktion.

Protokoll

Herstellung von Arthrobacter-Zellen zur Phagenisolierung

• Kultur Arthrobacter sp. KY3901-Kolonien streiften auf einer Luria Bertani (LB) Agarplatte, die 2-3 Tage bei 30 °C inkubiert wurde. Wähle eine Kolonie aus und gib sie mit einer sterilen Schleife zu 250 ml LB-Brühe in einer abgewickelten Kulturflasche und brüte sie in einem schüttelnden Inkubator bei 225 U/min bei 30 °C.
• Planen Sie etwa 24 Stunden Wachstum ein, um spätexponentielle/frühe stationäre Zellen für Phageninfektionsexperimente zu erhalten. Überwachen Sie den Zustand des bakteriellen Wachstums genau, um zu verhindern, dass die Zellen in den mittleren bis späten stationären Wachstumszustand gelangen.
  HINWEIS: Das Zellwachstum sollte eine optische Dichte von OD₆₀₀ zwischen 0,5 und 0,0,7 für die Phagenisolations- und Reinigungsverfahren/-schritte umfassen.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
LB Bouillon-Pulver	Fisher	BP9722-2
Granulierter Agar	Fisher	BP1423-2
Eppendorfer Röhren	Fisher	05-408-129
5-ml-Pipeten einzeln	Fisher	13-678-11D
50 ml konische Röhren	Fisher	76002844
15 ml konische Röhren	Fisher	76002845
10-ml-Pipeten einzeln	Fisher	13-676-10J
25-ml-Pipeten einzeln	Fisher	13-676-10K