Katheterassoziierte Harnwegsinfektion in einem Mausmodell

Zusammenfassung

Quelle: Conover, M. S. et al., J. Etablierung und Charakterisierung von Harnwegsinfektionen und CAUTI in einem Mausmodell. J. Vis. Exp. (2015)

Dieses Video zeigt das Verfahren zur Montage und Implantation eines transurethralen Katheter in einer weiblichen Maus, gefolgt von einer bakteriellen Impfung zur Etablierung katheterassoziierter Harnwegsinfektion und zur Untersuchung biofilmvermittelter Wirts-Pathogen-Interaktionen.

Protokoll

Alle Verfahren, die Tiermodelle betreffen, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem JoVE veterinärmedizinischen Überprüfungsausschuss überprüft.

1. CAUTI (katheterassoziierte Harnwegsinfektion) Modellprotokoll, Katheternadelvorbereitung für das CAUTI-Modell

1. Entfernen Sie die Kappe der 30-G-Nadel. Schneide ein 7 mm Stück PE10 (Polyethylen 10) Rohr und ein 5 mm Stück Silikonrohr wie RenaSIL. Fädeln Sie die Nadel mit PE10-Schlauch, bis der Schlauch die Nadelbasis berührt.
2. Dann führen Sie das 5-mm-Stück auf die PE10-haltige Nadel. UV (Ultraviolett) sterilisiert die Nadelbaugruppen über Nacht.
   HINWEIS: Beim Laden des Silikonschlauchs lassen Sie etwa 1 mm des Schlauchs über die Nadelspitze hinausragen.

2. E. faecalis OG1RF Bakterielle Inokulumpräparation

1. Bereiten Sie OG1RF-Inokulum ab 48 Stunden vor dem Impftag vor. Striche OG1RF auf eine BHI-Platte (Brain Heart Infusion) aus einer gefrorenen Brühe.
2. Wähle eine Kolonie aus, impfe sie in 10 ml BHI und ziehe sie statisch 18 Stunden lang bei 37 °C. Zentrifugiere die Kultur und wasche das Pellet (dreimal) in 1 ml sterilem 1x PBS.
3. Das bakterielle Pellet in 1x PBS (phosphatgepufferte Kochsalzlösung) wieder suspendieren. Messen Sie die bakterielle Optische Dichte und passen Sie die Konzentration an die gewünschte Inokulumgröße an. Die Standardkonzentration des verwendeten Inokulums beträgt 10⁷; Dies kann jedoch je nach Studiendesign variieren

3. Katheterimplantation

1. Reinigen Sie die Arbeitsstation mit 70 % Ethanol und decken Sie den Bereich mit einer Saugabdeckung ab (oder verwenden Sie eine sterile Flusshaube).
2. Befestigen Sie eine Katheternadel an einer leeren 1-ml-Spritze (TB oder Tuberkulin). Schneiden Sie ein quadratisches Stück Parafilm von 2,5 cm ab und geben Sie einen Klecks chirurgisches Gleitmittel (ungefähr so groß wie ein Groschen) obendrauf.
   HINWEIS: Zwei verschiedene Nadeln werden für die Ablagerung des Katheters und für das Inokulum verwendet, um eine versehentliche Impfung aufgrund der mechanischen Manipulation für die Katheterimplantation zu minimieren. Dies ermöglicht auch die Bequemlichkeit, weniger Impfnadeln vorzubereiten.
3. Betäuben Sie C57BL/6-Mäuse, indem Sie sie in ein 32-Unzen-Glasgefäß mit einem Tee-Infuser-Ball mit in 3 ml Isofluran getränkten Wattebäuschen oder in eine Verdampferkammer (nach dem Protokoll des Herstellers) legen, bis sie bewusstlos, aber noch normal atmen (1 Atemzug/Sekunde).
4. Dann legte du die Maus auf den Rücken auf ein Papiertuch und spreizte die Beine. Decken Sie die Nase der Maus mit einem Nasenkegel oder einem 50 ml konischen Röhrchen mit Wattebäuschen ab, die eine kleine Menge (ca. 1–2 ml) Isofluran enthalten.
   VORSICHT: Isofluran ist ein Inhalationsanästhetikum. Verwenden Sie sie in einem gut belüfteten Bereich und minimieren Sie das Einatmen durch den Forscher.
5. Lassen Sie die Blase vorsichtig abtasten, um das Wasserlassen zu induzieren und sicherzustellen, dass die Blase entleert ist. Wischen Sie den periurethralen Bereich mit einem 100%igen Ethanol-Tuch ab.
6. Desinfizieren Sie den periurethralen Bereich mit einer 10%igen Povidon-Jod-Lösung mit einem Applikator aus Baumwollspitze. Tupfen Sie die Impfnadel/Spritze, mit der Spitze voran, in das chirurgische Gleitmittel.
   HINWEIS: Povidon-Jod wird für die Katheterimplantation verwendet, eine stärkere aseptische Lösung als Alkohol. Die Katheterimplantation erfordert mehr mechanische Manipulation zum Einsetzen des Katheters und birgt daher ein größeres Kontaminationspotenzial.
7. Führe den Katheter in die Harnröhrenöffnung. Sobald Sie drin sind, verwenden Sie eine Pinzette, um das (7 mm PE10) lange Stück zur Blase zu schieben, wodurch der (5 mm Silikon-) kleine Katheter in die Blase eingetragen wird. Entfernen Sie sofort die Nadel, mit dem 7-mm-Schlauch noch befestigt.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Material für Katheter und Nadelvorbereitung:
30-G-Nadeln	BD Precision Glide	305106	30 G x 1/2 (0,3 mm x 13 mm)
PE10-Polyethylenrohr	BD	427400	Innendurchmesser -0,011 Zoll (0,28 mm); Außendurchmesser – 0,024 Zoll (0,61 mm)
RenaSIL 025 Platin-gehärtetes Siliziumrohr	Braintree Scientific, Inc.	SIL 025	Innendurchmesser – 0,012 x Außendurchmesser 0,025, 25 Fuß Spule
Material für Infektionen:
Isofluoran – Isothesie	Butler Schein	29405	250 ml
Klarglas-Glas mit gerader Seite	Kimble Chase	5413289V 21
Edelstahl-Tee-Infuser	Schefs-Amazon		Premium Loose Leaf Tea Infuser von Schefs – Edelstahl – Große Kapazität –
Nicht-sterile Wattebäusche	Fisherbrand	22-456-880
50-ml-Falcon-Röhren	VWR	89039-660
Isotec 3 -Vaporizer	Ohmeda	1224478
Ohrschlag	Fisher Scientific	13-812-201	(wenn nötig)
Betadin-Lösung	Betadin-Lösung		10% Povidie-Jod-topische Lösung
Wattestäbchen	Fisher Scientific	22-037-924	6 Zoll
Windeln für Bankdrücken	Fisherbrand	14206 63	Saugfähige Unterpolster (20"x36"-Matten)
Chirurgisches Schmiermittel	Surgilube	0281-0205-36
Zerschneidende Schere	Fine Science Werkzeuge, INC	14084-08
Micro-Adson-Tangette	Fine Science Werkzeuge, INC	11018-12
1 ml Spritze	BD	309659	Tuberkulin-Slipspitze
Parafilm	Bemis	PM996	4 Zoll x 125 FT
Eppendorfer Zahnrad	Fisherbrand	05-541-1
Eppendorf-Röhren	MIDSCI	AVX-T-17-C
Entnahme von Kathetern, Blasen und Nieren:
Homogenisator	PRO Scientific INC	Bio-Gen Pro 200
5 ml Polypropylen-Rundbodenrohr	BD	352063	für die Organhomogenisierung
Papiertuch	Georgia-Pacific
Ethanol	Pharmco-AAPER	11100020S	200 Proof
Costar™ Clear Polystyrolplatten (96-Brunnen)	Corning	3788
1x Phosphatnatriumsalzlösung	Sigma-Aldrich	P3813
BRANSONIC Ultraschallreiniger 1210	Branson Ultrasonics Corporation	1210