Etablierung eines Mausmodells von Brandinfektionen mit pathogenen Bakterien

Zusammenfassung

Quelle: Wang, Y., et al. In vivo Untersuchung der antimikrobiellen Blaulichttherapie für multiresistente Acinetobacter baumannii-Brandinfektionen mittels Biolumineszenzbildgebung. J. Vis. Exp. (2017)

Dieses Video zeigt, wie man eine Verbrennungsinfektion in einem Mausmodell etabliert, indem man einen erhitzten Messingblock anwendet, gefolgt von pathogenem bakteriellem Inokulum. Die Bakterien besiedeln die freiliegende extrazelluläre Matrix und bilden einen Biofilm, der in vivo Studien zu Wirts-Pathogen-Interaktionen ermöglicht.

Protokoll

Alle Verfahren, die Tiermodelle betreffen, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem JoVE veterinärmedizinischen Überprüfungsausschuss überprüft.

1. Mausmodell der Verbrennungsinfektion verursacht durch biolumineszente Acinetobacter baumannii

1. Verwenden Sie erwachsene weibliche BALB/c-Mäuse im Alter von 7-8 Wochen und einem Gewicht von 17-19 g. Lassen Sie die Mäuse sich mindestens 3 Tage vor Beginn des Experiments an die Laborbedingungen gewöhnen. Halten Sie die Mäuse in einem 12-Stunden-Hell/Dunkel-Zyklus unter Raumtemperatur von 21 °C und geben Sie ihnen Futter und Wasser ad libitum.
2. Betäuben Sie die Mäuse mit einer intraperitonealen Injektion eines Ketamin-Xylazin-Cocktails (100 mg/kg-20 mg/kg). Berühren Sie leicht die Palpebra jeder Maus mit einem Wattestäbchen; Das Fehlen des palpebralen Reflexes deutet auf eine angemessene anästhetische Tiefe hin. Bedecken Sie die Augen der Maus mit einer Tierarztsalbe, um zu verhindern, dass sie während der Anästhesie austrocknen.
3. Rasiere die Mäuse auf der Rückseite, um so viel Haut wie möglich freizulegen, indem du einen 50-Klingen-Haarschneider benutzt.
4. Legen Sie den Deckel einer 35-mm-Petrischale unter den Bauch jeder Maus, um den Rücken relativ waagerecht zu halten.
5. Kochen Sie Wasser in einem 250-mL-Becher (80 % voll) mit einer 10" x 10", 220 Volt Wechselstrom-(VAC)-Heizplatte. Tauchen Sie einen Messingblock (1 cm x 1 cm Querschnitt) in den Becher, bis das thermische Gleichgewicht mit dem Wasser erreicht ist. Das thermische Gleichgewicht dauert in der Regel <5 Minuten und wird durch das Nachkochen des Wassers im Becher angezeigt.
6. Vor der Entstehung der Brandverletzung verabreichen Sie präventive Schmerzmittel (eine subkutane Injektion von 0,1 mg/kg Buprenorphin) zur Schmerzlinderung.
7. Zehn Minuten nach den präventiven Schmerzmitteln drücken Sie den erhitzten Messingblock vorsichtig auf die rasierte Stelle auf dem Rücken der Mäuse für 7 Sekunden, um Brandwunden auszulösen.
   HINWEIS: Um thermische Verletzungen des arbeitenden Personals zu vermeiden, tragen Sie beim Brennen wärmeresistente Handschuhe.
8. Verabreichen Sie 0,5 ml sterile Kochsalzlösung durch subkutane Injektion, um Dehydrierung zu verhindern.
9. Fünf Minuten nach Auslösung der thermischen Verletzung wird 50 μL bakterielle Suspension mit 5 x 10⁶ koloniebildenden Einheiten (CFU) in phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) mit einer Pipette auf die Mausverbrennungen geimpft. Anschließend wird mit einem sterilen Wattestäbchen in einer Zickzackbewegung auf der Haut die Aliquots auf die Verbrennungen verschmiert, um die bakteriellen Zellen im verbrannten Bereich so gleichmäßig wie möglich zu verteilen.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Maus	Charles River Laboratories, Wilmington, MA	BALB/c	7-8 Wochen alt, 17-19 g Gewicht
Acinetobacter baumannii	Brooke Army Medical Center, Fort Sam Houston, TX	Klinisches Isolat	Technisch entwickelte lumineszente Spannung
Insulinspritzen	Fisher Scientific	14-826-79	BD Lo-Dose U-100 Insulinspritzen zur Injektion
Natriumchlorid	Fisher Scientific	721016	0,9 % Natriumchlorid
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung, 1x-Lösung	Fisher Scientific	BP24384	Ein Standardphosphatpuffer, der in vielen biomolekularen Verfahren verwendet wird
Inokulationsschleifen	Fisher Scientific	22-363-605	Zum Verschmieren des bakteriellen Inoclums auf der Brandfläche von Mäusen
Messingblock	Small Parts, Inc., Miami, FL	10 mm mal 10 mm	Zur Entstehung von Verbrennungen bei Mäusen
Extreme Dragon PBI/Kevlar-Handschuhe mit hoher Hitze	Superior Glove Works Ltd, Cheektowaga, NY	PBI83514	Hitzebeständige Handschuhe
Greiner-Gerichte	Sigma-Aldrich Co. LLC	P5112-740EA	35 mm ×10 mm
Corning-Digital-Heizplatte	Cole-Parmer Instrument Company, LLC	UX-84301-65	10" x 10", 220 VAC, zum Kochen von Wasser
Maus/Ratte Dünnlinien-Wasserbeheiztes OP-Bett	E-Z-Systeme	EZ-211	Verhindert Wärmeverlust und Unterkühlung während der Operation
Vet-Salbe	S&K Pharma, GmbH	Kerato Biciron 5 %, Augensalbe	Augensalbe zur Vorbeugung von Augentrockenheit