Biolumineszenzbildgebung von Acinetobacter baumannii-infizierten Brandwunden bei Mäusen

Zusammenfassung

Quelle: Wang, Y., et al. In vivo Untersuchung der antimikrobiellen Blaulichttherapie für multiresistente Acinetobacter baumannii-Brandinfektionen mittels Biolumineszenzbildgebung. J. Vis. Exp. (2017)

Dieses Video demonstriert das Verfahren zur Bildgebung von Brandwundinfektionen bei Mäusen, die mit Acinetobacter baumannii geimpft sind und ein biolumineszentes Operon tragen. Es zeigt, wie die Oxidation von luciferase-katalysierten Substraten Licht proportional zur bakteriellen Last erzeugt und so eine Echtzeitüberwachung des Infektionsverlaufs mittels eines biolumineszenzbildenden Bildgebungssystems ermöglicht.

Protokoll

Alle Verfahren, die Tiermodelle betreffen, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem JoVE veterinärmedizinischen Überprüfungsausschuss überprüft.

1. Biolumineszenzbildgebung von Infektionen bei Mäusen

1. Fotografieren Sie die Mäuse mit einem Low-Light-Bildgebungssystem, das eine verstärkte, ladungsgekoppelte Gerätekamera, einen Kameracontroller, eine Probekammer und einen Bildprozessor umfasst.
2. Betäuben Sie die Mäuse mit einer intraperitonealen Injektion eines Ketamin-Xylazin-Cocktails (100 mg/kg - 20 mg/kg). Berühren Sie leicht das Palpebral der Mäuse mit einem Wattestäbchen; Das Fehlen des palpebralen Reflexes deutet auf eine angemessene anästhetische Tiefe hin.
3. Starten Sie die Live-Imaging-Software. Im angezeigten Bedienfeld klicken Sie auf Initialisieren. Warten Sie, bis die Farbe der Temperaturbox grün wird, was anzeigt, dass die Temperatur der Stufe in der Probekammer 37 °C erreicht hat.
4. Stellen Sie die Mäuse auf die Bühne (37 °C) in der Probekammer des Bildgebungssystems, mit den infizierten Verbrennungen direkt unter der Kamera.
   HINWEIS: Die Biolumineszenz der Bakterien könnte abnehmen, wenn die Verbrennungen austrocknen. Daher wird empfohlen, die Mausverbrennungen vor der Bildgeberung mit PBS einzucremen.
5. Setze im Bedienfeld ein Häkchen neben "Lumineszenz". Wählen Sie "Autobelichtung", damit die Belichtungszeit für die Bildgebung von der Live-Bildgebungssoftware basierend auf der Biolumineszenzintensität optimiert wird.
6. Wählen Sie "C" aus der Dropdown-Liste "Sichtfeld". Wählen Sie die Option "Mittenbereich scannen", damit die Software den Brennweite bestimmen kann. Setze ein Häkchen neben Overlay.
7. Klicken Sie auf "Erwerben", um das Bild aufzunehmen. Im Kästchen "Bildetikett bearbeiten" klicken Sie auf "OK"; es erscheinen ein "Bildfenster" und "Tollpalette".
8. Stellen Sie Auto-ROI-Parameter für die automatische Auswahl ein.
9. Quantifizieren Sie die Biolumineszenzintensität als relative Lumineszenzeinheiten (RLUs) und zeigen Sie die Biolumineszenz auf einer falschen Farbskala von rosa (am intensivsten) bis zu blau (am wenigsten intensiv).
10. Berechnen Sie den Überlebensanteil der Bakterien bei Mausverbrennungen zu unterschiedlichen Zeitpunkten basierend auf einer Analyse der Biolumineszenzintensität. Der Überlebensanteil von Bakterien zu einem bestimmten Zeitpunkt = die zu diesem Zeitpunkt gemessene Biolumineszenzintensität / die Biolumineszenzintensität, die direkt vor der antimikrobiellen blauen Lichtexposition gemessen wurde.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
IVIS	PerkinElmer Inc, Waltham, MA	IVIS Lumina Serie III	Präklinische In-vivo-Bildgebung
LED-Leuchtdiode	VieLight Inc, Toronto, Kanada	415 nm	Lichtquelle zur Beleuchtung
Maus	Charles River Laboratories, Wilmington, MA	BALB/c	7-8 Wochen alt, 17-19 g Gewicht
Acinetobacter baumannii	Brooke Army Medical Center, Fort Sam Houston, TX	Klinisches Isolat	Technisch entwickelte lumineszente Spannung
Greiner-Gerichte	Sigma-Aldrich Co. LLC	P5112-740EA	35 mm ×10 mm